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病理学是以形态学为基础的桥梁学科,需要掌握的知识很多,这是小编为大家整理的病理学试验技术论文，仅供参考!
病理学试验技术论文篇一
皮肤组织病理学检查
【关键词】皮肤;病理学;标本制备
皮肤是人体的一个重要器官，由赵辨教授主编的新版《中国临床皮肤病学》收集了1700多种皮肤病。皮疹是皮肤病的主要表现，临床变化多种多样，有的缺乏特异性，有些不同的皮肤病临床皮疹类似，需要借助皮肤组织病理学检查等技术才能做出诊断。由于皮肤组织位于人体表面，取材较容易，可对处于不同阶段的皮疹进行病理检查，是皮肤科高年资临床医生必需掌握的临床辅助诊断方法。
皮肤病理检查(简称活检)是通过环钻或小手术取下一小部分病灶皮肤，经过固定、染色等技术在显微镜下或电脑上观察其变化的诊断技术。
适应证
活检的目的在于确定诊断和了解病情，因此，对任何临床上诊断不明的皮肤病都可以进行皮肤活检，根据其诊断价值的不同可分为以下几类。1 有高度诊断价值者，如基底细胞癌、鳞状细胞癌、痣等良恶性肿瘤、病毒性皮肤病如传染性软疣、角化性皮肤病如毛囊角化病、汗管角化病等。
2 有诊断价值者，如疱疹类皮肤病(天疱疮、家族性慢性良性天疱疮等)、代谢性皮肤病(原发性皮肤淀粉样变性、腔前黏液性水肿等)、某些肉芽肿性皮肤病(环状肉芽肿、结节病等)、有一定特征的炎性疾病如扁平苔藓、结核、麻风、深部真菌等。
3 早期发现病损的不良转化或癌前病变。
4 提示做进一步的其他检查或与全身其他疾病的关系。
5 疑难少见病例，通过皮肤病理及其他检查寻找诊断线索。
6 对有些不具特征性组织像的皮肤病虽然不能直接诊断，但仍具有参考或除外其他疾病的价值。
综上所述，皮肤活检的适应证较广，不过应尽量做到有的放矢，而切忌任意采取标本，造成患者不必要的痛苦。
皮疹活检标本的选择
在选择皮肤活检标本时应注意以下原则。
1 选择发育成熟的损害，因为早期皮疹常为非特异性，而晚期皮疹大多处于恢复或变性、坏死阶段。
2 选择早期皮疹，适用于疱疹性皮肤病以及含有病原微生物的皮疹，最好在损害出现24～48小时以内取材。
3 对于环状皮疹应选择活动边缘部分，如切取中央不活动的部分，病变可能已趋向于消退而找不到典型病变。
4 切取标本时应常规包括皮下组织，因不少皮肤病的典型病变在皮下组织。有些特殊疾病如皮肌炎等还要切到肌肉。
5 取材时应包括一小部分正常组织，以便与病变组织对照。
6 应尽量避免在腋窝、腹股沟、面部显眼处或关节活动部位等处取材。
获取皮肤标本的方法
1 手术切除 最常用，可根据需要切取大小不同的皮肤标本，深及皮下组织，对疱疹特别是皮下结节、囊肿和肿瘤尤为适合。注意事项：(1)切刀须锐利，切除的组织上下等大;(2)切口方向与皮纹一致，两端对齐;(3)避免夹压组织，尽量夹持切下组织的两端，切忌夹持中央部分。
2 环钻 简便易行，适用于小损害，或病变只限于表皮和真皮，或手术切除有困难的病例。
3 削切 只能切取表皮浅层，一般很少采用。
活检标本的切片制作
皮肤切片的制作过程同其他病理组织，操作步骤如下：标本-固定-脱钙-水洗-硬化-脱水-透明-包埋-切片。皮肤组织结构不同于其他器官，分层明显，因而欲制成高质量的皮肤切片，应注意以下几点：(1)脱水最好保持在一定温度(52～54℃)下进行，脱水应完全，依次在70%、80%、95%酒精中各脱水2小时，最后在无水酒精中(Ⅰ和Ⅱ)各脱水1.5小时;(2)透明时间视皮肤组织块的大小和厚薄而定，一般经二甲苯Ⅰ和Ⅱ各2～3分钟;(3)石蜡包埋浸蜡时，保温箱内温度一般调节在52～56℃溶蜡，温度过高可使组织发生变质。
切片染色
1 苏木素-伊红染色法(简称HE) 常规病理染色方法，染色过程中应注意：(1)皮肤石蜡包埋切片的脱蜡应完全，冬季可预先放在56℃温箱内2小时，使切片上剩余的石蜡溶解;(2)切片于二甲苯Ⅰ和Ⅱ内浸泡应各达15～20分钟;(3)切片经苏木素染色后，在染伊红前，经1%酸性酒精处理2～3秒，流水冲洗至少20～30分钟。
2 特殊染色法 对某些皮肤病的诊断和鉴别诊断有一定帮助。常用的一些特殊染色方法、目的和结果见表1。
3 免疫组织化学染色 HE染色切片，有时很难区分其组织来源，而确定组织来源对诊断具有重要价值，这时需免疫组织化学染色来帮助诊断。常用免疫组织化学染色见表2。
切片观察
传统的切片观察是通过显微镜下进行，根据需要有普通光学、偏振光、荧光显微镜等，随着科学的发展，通过切片扫描技术，可直接在电脑上进行读片诊断。
诊断思维
1 整体观，不能只从局部或片段来看问题，先低倍扫视分析病变的结构模式，对每一个活检病例应了解其全貌，如有必要还应该对各个阶段的皮疹作相应的病理检查。
2 同一疾病的不同阶段其病理改变亦不尽相同，对每一个疾病来说，都有一个过程，大致可分为早期、充分发育期和晚期，我们均应熟悉疾病各阶段组织学改变的特点，以达到正确诊断。
3 密切结合临床，对每一个活检的病例，应仔细观察并作出详细记录，以便于在作病理诊断时，能与临床情况结合起来考虑避免犯错误。
4 捕捉诊断线索，排除假象，通过鉴别诊断达到正确、特异的诊断。
5 正确使用临床皮肤病学及组织病理学的术语。
6 掌握皮肤基本病理变化及各种皮肤病的病理特点，反复实践，逐步掌握皮肤病理诊断技术。
7 临床是基础，HE切片对诊断很重要、免疫组化染色和分子病理是其必要补充。
病理学试验技术论文篇二
乙草胺致癌病理学试验的评价
关键词： 乙草胺 毒理
乙草胺(Acetochlor)是选择性旱田芽前除草剂，主要用于玉米、大豆、棉花、甘蔗及多种菜田，每亩一次施药50～80 g可控制整个生长期无杂草危害，是有推广价值的新型除草剂。急性毒性经口、经皮LD50分别为2 148 mg/kg、4 166 mg/kg，SD大鼠亚慢性90 d喂喟试验的最大无作用剂量为12 mg·kg-1..d-1,Ames、微核及睾丸染色体试验结果均为阴性。我们又进一步作了两年致癌试验，现 报告如下。
1 材料与 方法
1.1 供试样品 95%乙草胺由江苏省昆山化工厂、南通化工厂、辽宁省大连农药厂、河北省宣化农药厂分批提供。
1.2 实验动物 清洁级5周龄SD健康大鼠，由上海BK公司提供，动物检疫驯化1周开始给药。设1个对照组，200、700、2 000 mg/kg·饲料3个投药组，按鼠日均进食量折算剂量相当于12、42、120 mg·kg-1..d-1。 应用 计算 机随机分组，每组雌雄各48只，共384只。
1.3 动物饲养 试验在全封闭屏障系统内进行。其系统内平均温度(22±4)℃，湿度(55±10)%，光照200 lx左右，空气经初、中、高三级过滤(过滤率为99.97%)，换气12～16次/h，系统保持微正压，噪音60 dB以下，氨浓度20 mg/kg以下。采用自动饮水装置供动物饮用。动物在悬挂式铝合金笼内单笼饲养。饲料经60Co照射为无菌粉料。试验期间动物自由摄食饮水。
1.4 临床观察 体重称量0～13周每周1次，14～26周每2周1次，27～104周每4周1次。耗食称量：每周1次。每天观察1次，濒死动物每天观察两次。
1.5 病理检查 试验期间濒死或 自然 死亡动物随时解剖检查，于第52周做阶段解剖，每组雄雌动物各5只，其余均在活体试验终期(第104周)全部解剖。取出脑、脑垂体、甲状腺、甲状旁腺、胸腺、气管、肺、心、肝、脾、肾、肾上腺、食道、胃、十二指肠、空肠、回肠、结肠、盲肠、直肠、肛门、胰腺、膀胱、前列腺、精囊腺、睾丸、卵巢、附睾、子宫、乳腺、皮肤、大腿骨、胸骨、淋巴结、眼球、唾液腺及所有肉眼认为异常的 组织及脏器。称重脏器包括心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、脑、睾丸、卵巢。标本经体积分数为10%的中性福尔马林缓冲液固定5～7 d，取材之后再次固定12 h。组织以乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片，HE染色，树胶封固。光镜检查。记录病变的种类及程度。
1.6 数据处理 体重、耗食等用t检验。肿瘤发生率、死亡率等用χ2检验。
2 实验结果
2.1 肿瘤发生率 本试验384只动物其中222只出现肿瘤，雄性95只(42.97%)，雌性127只(57.21%)，雄雌比1∶1.3，这种差异与雌鼠脑垂体和乳腺肿瘤的自然发生率较高有关。基中垂体肿瘤高剂量与低剂量分别为25%和37.5%，雌性分别为54%和62.5%。乳腺肿瘤雄性各组只是偶发1～2例，雌性对照组为33.33%，高剂量组为35.41%。白血病雄性对照组1例，而高剂量组未发现，雌性对照组1例。高剂量组2例。肺腺瘤雄性对照组及中、高剂量组各1例，雌性仅高剂量组出现1例。肝癌雄性对照组和高剂量组各1例，雌性各剂量组均未发生。甲状腺瘤雄性剂量组发生率较高，低剂量组2例，中、高剂量组各1例，而雌性仅高剂量组有1例。甲状腺癌雄性对照组、高剂量组各1例，雌性仅高剂量组有1例，这些差异均无显著性(表1)。
2.2 肿瘤检出数 在222只发生肿瘤的大鼠中共检出298个肿瘤，其中每只有1、2、3、4、6个肿瘤的大鼠分别为166、41、6、8、1只。平均肿瘤数对照组、低、中、高剂量组雄性依次为1.0、1.45、1.11、1.18个;雌性依次为1.43、1.43、1.41、1.81个。各组均无明显的剂量-反应关系。
2.3 不同时期肿瘤发生数 各剂量组大鼠肿瘤发生时间，除雄性低剂量组1例脑垂体肿瘤发生于第10个月外，其余都在1年半以后发生，在发生时间上各剂量组和对照组差异无显著性。
2.4 动物 自然 死亡累积、时间及死因 分析 中途自然死亡动物的累积数，对照组与高剂量组雄性分别为18只(37.50%)、15只(31.31%);雌性分别为19只(39.58%)、16只(33.33%)，无 统计学意义。动物死亡时间各剂量组间差异亦无显著性。中途死亡动物主要死因为脑垂体肿瘤、乳腺肿瘤、白血病等，各剂量组无明显差异。
3 讨论
本试验结果高剂量组出现轻度中毒现象，与对照组比较体重受到抑制7%，各剂量组104周生存率均在50%以上。而且死亡大鼠自溶不能进行病理检查者不超过5%，这些都符合国际致癌试验的设计要求[1]。
表1 各剂量组肿瘤类型及发生数(只)
肿瘤雄性雌性
0(mg/kg)200(mg/kg)700(mg/kg)2 000(mg/kg)0(mg/kg)200(mg/kg)700(mg/kg)2 000(mg/kg)
肺腺瘤10110001
心纤维瘤01000000
肝癌10010000
胆管瘤00000010
肾胚胎瘤00200000
胰岛细胞瘤10200000
胰腺瘤00010000
胰腺癌00110000
甲状腺腺瘤02110001
甲状腺腺癌10010001
脑垂体腺瘤1817161228232624
脑垂体腺癌00102532
乳腺腺瘤01002521
乳腺纤维腺瘤03111391312
乳腺癌00201004
肾上腺嗜铬细胞瘤11011000
胃乳头状瘤00100100
胃恶纤组00000100
脑血管瘤00100000
脑腺瘤01000000
脾网织细胞瘤01000001
白血病22101012
子宫血管纤维瘤00001000
子宫肌瘤00000010
皮下纤维瘤01000000
纤维肉瘤00010000
血管瘤00000101
血管恶纤组00010020
皮肤鳞癌01000000
腹腔纤维瘤00010000
肠系膜淋巴囊肿00000001
每组实验动物数为48只 农业部农药检定所[2] 参考 WHO的致癌试验判定标准，制定出我国致癌试验结果出现下列之一，并经统计学处理有显著差异者可以认为致癌阳性结果：(1)肿瘤仅发生在染毒组，对照组无此类肿瘤;(2)染毒组与对照组均发生肿瘤，但染毒组明显高于对照组;(3)染毒组多发生肿瘤多，而对照组无或少数动物有多发性肿瘤;(4)染毒组与对照组肿瘤发生率无明显差异，但染毒动物发生时间较早。本试验结果不具有上述情况，此外从恶性肿瘤、癌前病变发生率来看，染毒组与对照组差异无显著性，而且出现的各类肿瘤其发生率都在SD大鼠自发性肿瘤背景范围之内[3]，林裕造等[1]还提出值得重视的3点补充意见：(1)在染毒组出现该动物品系中很少见的肿瘤，即使个别出现也应引起重视;(2)恶性肿瘤发生率低而良性肿瘤发生率高也是重要指标;(3)即使都属于自发性肿瘤，但染毒组发生早对阳性判定也有一定价值，本试验结果未见类似上述情况。
国外有人曾统计通过致癌化学物质制作癌症模型试验结果证明，其诱发肿瘤与自发性肿瘤不同点是大部分在1年以内出现诱发肿瘤，并提出如高剂量组1年半以上出现的肿瘤难以作为致癌指标。本试验中出现的肿癌大部分在1年以上，而且绝大多数在1年半以上，如雌性大鼠乳腺癌高剂量组4例，对照组1例都是在两年终期出现，当属自发性肿瘤。 文献 报道SD大鼠自发性肿瘤的平均肿瘤数雄性1.6个，雌性2.0个。而本试验中发生肿瘤动物的平均肿瘤数略低，雄性、雌性分别为1～1.45、1.41～1.81个，这可能与检查 组织数量多少有关。
综上所述，乙草胺试验结果提示在本中心现有试验条件下，对SD大鼠未出现致癌阳性结果。
参考文献
[1] 林裕造、高桥道人.动物致癌性试验的评价.病理と 临床，1983，1：895-904.
[2] 卫生部，农业部.农药安全性毒 理学 评价程序.1991，8-9.
[3] 今井清，吉村慎介.Sprague-Dawley系自然发生肿瘤.J Toxicol Pathol,1988,1：7-12.
