爱华网中药现代化,乌骨藤,化学成分,抗肿瘤作用,作用机理,指纹谱
在中药现代化的思想指导下，综合运用现代科学技术的最新研究成果，研究开发现代中药新药，是药物分析学科解决生产和科研中实际问题的重要内容之一；我们选定疗效可靠但有效成分不明的抗肿瘤中药乌骨藤进行了前期研究。本草考证发现，乌骨藤始载于《滇南本草》，基原为萝藦科牛奶菜属植物通光散，存在严重的同名异物现象；性味苦，微寒，具有消炎、清热解毒、止咳平喘、散结止痛之功效；主治气管炎，支气管哮喘，败毒抗癌，用于癌瘤积毒。采用MTT法和稻瘟霉法双重模型跟踪筛选抗肿瘤活性部位，
应用GC-MS法首次从乙醚部位中鉴定了23个化合物为c-sitosterol (1)，phthalic acid(2)，trans-?(sup9)-octadecenoic acid(3)，urs-12-en-3á-ol,acetate(4)，silane,cyclohexyl dimethoxymethyl-(5)，9,19-cyclolanost-24-en-3-ol,acetate(6)，stearicacid(7)，á-amyrenyl(8)，germanicol(9)，lup-20(29)-en-3á-ol,acetate(10)，palmiticacid (11)，vanillin(12)，cis-9,cis-12-octadecadienoicacid(13)，oxiraneundecanoic acid,3-pentyl, methylester,cis-(14)，squalene(15)，cholest-5-ene-16,22-dione,3á,26-dihydroxy-,3-acetate,(20S,25R)-(16)，campesterol(17)，stigmasterol(18)，kauren-18-ol,acetate,4a-(19)，neoclovene(20)，13,27-cyclours-11-en-3-ol,acetate(21)，9,19-cyclolanost-25-en-3-ol,24-methyl-(3á,24S)- (22)，13,27-cyclours-11-en-3ol,acetate(23)。从石油醚部位中鉴定出另外9个化合物为oleicacid(24)，5,8,11-heptadecatrienoic acid, methyl ester(25)，palmiticacid,ethyl ester(26)，hexadecatrienoic acid,methyl ester(27)，arachicacid(28)，n-docosanoicacid(29)，cholesta-4,6-dien-3-ol(30)，stigmasterol-3,5-dien(31)，cholesta-6,22,24-trien,4,4-dimethyl-(32)。应用现代色谱和光谱技术，从云南产乌骨藤中分离鉴定了16个化合物，其中2个为新化合物：通光藤苷J(Sub9)和乌骨藤K(Sub 16)；10个为首次分得的化合物，分别为：齐墩果-18烯-3-乙酯(Sub 2)，豆甾醇(Sub3)，蔗糖(Sub 14)，大叶牛奶菜甙乙(Sub 6)，大叶牛奶菜甙丁(Sub 4)，琥珀酸(Sub5)，di-pyrazolidin-1-yl-methanone(Sub 8)，牛奶菜醇(Sub 10)，二氢牛奶菜醇(Sub12)，喙柱牛奶菜甙乙(Sub 13)；4个为已知化合物，分别为：β-谷甾醇(Sub 1)，硬脂酸(Sub 7)，棕榈酸(Sub11)和α香树脂醇乙酸酯(Sub 15)。其中用GC-MS从乙醚部位中已鉴定出Sub 1、3、7、11
体外乌骨藤对人骨肉瘤细胞Saos-2、人胃癌细胞SGC-7901、人肝癌细胞Bel-7404等多种肿瘤细胞的生长抑制显示不同的敏感性；微量液基稀释法测定体外抗真菌活性，对热带念珠菌显示较强的抗真菌活性，但对其余真菌活性较弱或无活性。体内乌骨藤中的水溶性部位和脂溶性部位对C57BL/6J小鼠肝癌Hep1-6的生长均有明显的抑制作用，以总皂苷高剂量组为最高；但具有一定的毒性。采用流式细胞仪分析技术，观察到95%皂苷部位和消癌平注射液可体外诱导SMMC-7721细胞发生凋亡，细胞主要停留在G1期，检测到Sub-G1峰，约占32.94%；在50μg·ml-1药物作用7d后细胞出现凋亡晚期改变。首次采用ELISA法观察到消癌平注射液不显著影响C57小鼠腹腔巨噬细胞释放肿瘤坏死因子(TNF-α），呈现双相作用，总皂苷低浓度时具有刺激作用，而乙醚部位则表现为抑制释放作用。
首次采用ELISA法观察到乙醚部位与乙醇总提物能诱导C57小鼠产生白细胞介素2(IL-2)，而消癌平注射液和总皂苷则主要表现为抑制作用；用药组小鼠的脾脏肉眼可见大于对照组，肿瘤组织存在严重的组织坏死现象。首次采用体外抗病毒模型观察了乌骨藤的抗病毒作用。乌骨藤对HepG2.2.15细胞乙型肝炎病毒具有显著的抑制作用，乙醚部位对HBsAg和HBeAg的抑制作用较95%乙醇提取的皂苷强，呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性。采用褶合光谱法进行了乌骨藤抗紫外线C致小牛胸腺DNA突变作用的初步研究，利用褶合光谱差谱值、差谱分布区域等特征参数，发现乌骨藤具有一定的抑制作用，其抑制作用机制与对照药物DMSO相似。为提升乌骨藤的质量标准，达到减毒增效和建立稳定、可控的目标，进行了C21甾体苷类代表性成分乌骨藤苷J的定量分析和中药指纹谱分析。建立了测定乌骨藤苷J含量的HPLC方法和HPCE方法，2种分析方法的具有良好可比性，平行测定结果的相关系数为0.9973；不同产地乌骨藤中所含J乌骨藤的含量相差较大，用乌骨藤苷J为指标，发现C21甾体苷成分在不同药用部位中的积累和各化学部位中的变化规律，制剂中通光藤苷J的含量相差很大。以常见混用品黑骨藤为对照，测定了不同产地乌骨藤的高效液相色谱指纹谱、高效毛细管电泳指纹谱、毛细管气相色谱指纹谱，红外漫反射光谱法指纹谱傅立叶近红外漫反射光谱法指纹谱，进行聚类分析，鉴别结果与形态学基本一致；为乌骨藤药材的道地性研究提供了依据。本研究的为乌骨藤的中后期研究奠定了坚实的基础.
