爱华网原花色素的提取和应用
2013.04.05清明实验报告
指导老师：骆乃伦
组长：孙晓晨
组员：王子珩 吴超 陈恺 朱欣然 顾舒晨 凌睿 洪伟博 史鑫松 潘姿吟
分工：
策划部 | 宣传部 | 公关部 | 媒体部 | 实验部 | 后勤部 | ||
实验组 | 学术组 | 统计组 | |||||
孙晓晨 | 潘姿吟 朱欣然 | 顾舒晨 陈恺 | 史鑫松 | 陈恺 顾舒晨 朱欣然 王子珩 | 洪伟博 凌睿 吴超 | 潘姿吟 孙晓晨 | 吴超 |
总策划和总调度 | 记录活动 制作宣传资料 | 联系安排活动具体时间地点 | 照片视频记录和后期处理 | 负责具体实验 | 学术部分的探究 提供实验思路 | 数据统计以及后期的分析和总结 | 实验后的药品、器材处理 |
一、实验目的
了解原花色素及其分离提纯的常用方法，并从山楂片中提纯原花色素。
二、实验原理
原花色素，也称原花青素（proanthocyanidins）,是一类从植物中分离得到的在热酸条件下能产生花色素的多酚化合物，它既存在于多种水果的皮，核和果肉中，如葡萄，苹果，山楂等。也存在于如黒荆树，马尾松，思茅松，落叶松等的皮和叶中。
原花色素属于生物类黄酮（flavonoids）,它们是由不同数量的儿茶素或表儿茶素聚合而成，最简单的原花色素是儿茶素的二聚体，此外还有三聚体，四聚体等。依据聚合度的大小，通常将二至四聚体称为低聚体，而五聚体以上的称为高聚体。从植物中提取原花色素的方法一般有两种，分别是用水抽提或用乙醇抽提。其抽提物为低聚物，称之为低聚原花色素。
提纯方法：
利用低聚原花色素溶于水的特点，用热水煮沸抽提原花色素，再用大孔吸附树脂吸附，洗脱得到原花色素。
D101树脂是一种球状，非极性教练聚合物吸附剂，具有相当大的比表面积和适当的孔径，对皂苷类，黄酮类，生物碱等物质有特殊的选择性，适用于从水溶液中提取泪滴性质的有机物质。
三、实验试剂
D101树脂
60％乙醇
1mg/ml原花色素标准品（实验室提供）
精确称取10.0mg原花色素标准品用甲醇溶解，与10.0ml容量瓶中定容至刻度。
四、实验操作
1.材料处理：
称取新鲜山楂10.0g，剪成细小块状，置于锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，沸水浴45min，间期混匀。冷却后加入20ml蒸馏水，抽滤，滤液备用。
2.装柱：
取一根层析柱（1.5×20cm），洗净，竖直装好，关闭出口，加入蒸馏水约1cm高，用烧杯取一定量已处理好的大孔吸附树脂D-101，搅匀，严管内壁缓慢加入，待柱底积约1cm高时，缓慢打开出口，继续装柱至高度15cm（液面高于树脂约3cm）。
3.平衡：
用蒸馏水洗2倍体积的柱床体积（约30ml），控制流速在1ml/min左右,至流出液pH显中性。
4.收集
滤液上样(约2ml/min)。上完样后，先用蒸馏水洗2倍柱床体积洗脱（1ml/min 约30min），然后换60%乙醇进行洗脱，控制流速在1ml/min。待有红色液体流出时开始收集，直至收集液无红色为止。
五、注意事项：
1.实验前应检查层析柱是否完好，有无堵塞或漏气现象。
2.装柱要求连续、均匀、没有气泡和断纹，液面不得低于树脂表面，否则应重新装柱。
3.洗脱时流速不宜过快。
六、实验反思
虽然列举出了注意事项，但在实际操作中由于第一次接触到如层析柱这样仪器，使用起来未免有些生疏，因此始终未见红色液体流出，第一次实验失败。
七、实验计划
继续分离提纯山楂中原花色素，
学会用铁盐催化比色法测定其含量。
