爱华网- 中文名称：
- 巨噬细胞
- 英文名称：
- macrophage
- 定义1：
- 单核吞噬细胞系统中高度分化、成熟的细胞类型。由血液中单核细胞迁入组织后分化而成，在不同器官、组织中有不同类型和命名，其表达Fc受体、C3b受体和CD14，在固有免疫中发挥防御功能，也是参与适应性免疫的专职抗原提呈细胞。
- 所属学科：
- 免疫学（一级学科） ；免疫系统（二级学科） ；免疫细胞（三级学科）
- 定义2：
- 单核吞噬细胞系统中高度分化、成熟的长寿命的细胞类型。具有较强的吞噬功能。
- 所属学科：
- 细胞生物学（一级学科） ；细胞免疫（二级学科）
简介
刺激巨噬细胞做它该做的清道夫工作，即可清除老鼠大脑中的脑斑。脑斑是蛋白质的堆积物，是老年失智症的病征之一。巨噬细胞是扮演清道夫角色的免疫细胞，巨噬细胞中的合成物转型生长因子贝他（TGF-beta），具有抑制巨噬细胞活动的功能，以免产生失控反应。老年失智症的大脑，均有转型生长因子贝他浓度升高的现象。科学家认为转型生长因子贝他浓度偏高，是因老年失智症的脑斑会引起发炎，而转型生长因子贝他加，是为减轻发炎，但新的实验结果显示，情况并非如此。
科学家以基因改造的方式，让老鼠的转型生长因子贝他，无法对在外周循环中的巨噬细胞发出讯号。科学家发现，如此做后，外周循环的巨噬细胞会大举进入老年失智症老鼠的大脑中。 康乃狄克州耶鲁大学医学院陶恩说，外周循环巨噬细胞渗透大脑的动作，即是老年失智症老鼠的疗方。这项结果大出陶恩意料。之前科学家的论点是，提高大脑的免疫反应可能加重发炎，因而对病情有害。实验中，基改老鼠的脑斑有九成消失无踪，而且老鼠的官能反应也获得改善，例如走迷宫不再那么容易迷失方向。陶恩说，若科学家能以药物，封阻人体外周循环中的转型生长因子贝他，应该也能达到动员外周巨噬细胞进入大脑，清除老人斑的目的。陶恩的研究团队已将研究重心，改为寻找可封阻转型生长因子贝他的药物。
培养方法
巨噬细胞也建有无限细胞细，大多来自小鼠，如P338D1、S774A.1、RAW309Cr.l等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难以建株。培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞，以小鼠腹腔取材法最为实用，其法如下：
1、实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml（勿注入肠内）。
2、引颈杀死动物，手提鼠尾将全鼠浸入70％酒精中3～5秒。
3、置动物于解剖台上，用针头固定四肢，双手持镊撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，但勿伤及腹膜壁。
4、再用70％酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中，同时从两侧用手指揉压腹膜壁，令液体在腹腔内充分流动。
巨噬细胞
5、用针头轻轻挑起腹壁，使动物体微倾向一侧，使腹腔中液体集于针头下吸取入针管内。
6、小心拔出针头，把液体注入离心管中，250g4℃离心10分钟，去上清，加10mlEagle培养基。
7、计数细胞，每只小鼠可产生20～30×105细胞，其中90％为巨噬细胞。
8、为获取3×105帖附细胞/平方厘米，需接种2.5×106/ml。
9、为纯化培养细胞，去除其它白细胞，接种数小时后，去除培养液，用Eagle液冲洗1～2次后，再加新Eagle培养液置37℃CO2温箱中培养。
细胞培养是无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁，空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，而洗刷消毒在另一室。[1]
常用设施及设备
(1)超净工作台：也称净化工作台，侧流式，直流式和外流式三大类。
(2)无菌操作间：一般由衣间，缓冲间和操作间三部分组成。操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱，离心机，倒置显微镜等。缓冲间可放置电冰箱，冷藏器及消毒好的无菌物品等。
(3)操作间：普通培养箱，离心机，水浴锅，定时钟，普通天平及日常分析处理物
(4)洗刷消毒间：烤箱，消毒锅，蒸馏水理器及酸缸等。
(5)分析间：显微镜，计算机及打印机等。
培养器皿
常用细胞培养器皿有培养瓶，培养板，培养皿等。常准备量是使用量的三倍。器皿应选择透明度好，无毒，利于细胞粘附和生长的材料，常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品。常用的器皿有下面几种。
(1)液体储存瓶：用于储存各种配制好的培养液，血清等液体，常用规格有500ml，250ml，100ml等几种。
(2)培养瓶：根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异，用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀，便于细胞贴壁生长和观察，瓶口要大小一致，口径一般不小于1cm，允许吸管入瓶内任何部位，规格有200ml，100ml，50ml，25ml，10ml等几种。
(3)培养皿：用于开放式培养及其它用途。分直径30mm，60mm，120mm等几种。
(4)吸管：常用的有长吸管和短吸管两类，长吸管也称刻度吸管。其改良后管上部有球型刻度称改良吸管，刻度吸管用于移动液体。常用1ml和10ml两种。短吸管也叫滴管，分弯头和直头两种。
(5)离心管：离心管是细胞培养中使用最广泛的器皿，根据用途不同形态各样，常用于细胞培养的离心管有大腹式尖底离心管和普通尖底离心管两类。前者分别为50ml，30ml，15ml；后者则多为10ml和5ml。
(6)其它：如三角烧瓶，烧杯，量筒，漏斗，注射器等。
细胞培养温度
维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定而适宜的温度。不同种类的细胞对培养温度要求也不同。人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃，偏离一温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至
死亡。培养细胞对低温的耐受力较对高温强，温度上升不超过39℃时，细胞代谢与温度成正比；人体细胞在39-40℃1小时，即能受到一定损伤，但仍有可能恢复；在40-41℃1小时，细胞会普遍受到损伤，仅小半数有可能恢复；41-42℃1小时，细胞受到严重损伤，大部分细胞死亡，别细胞仍有恢复可能;当温度在43℃以上1小时，细胞全部死亡。相反，温度不低于0℃时，对细胞代谢虽有影响，但并无伤害作用;把细胞放入25-35℃时，细胞仍能生存和生长，但速度减慢；放在4℃数小时后，再回到37℃培养，细胞仍能继续生长。细胞代谢随温度降低而减慢。当温度降至冰点以下时，细胞可因胞质结冰受损而死亡。但是，如果向培养液中加入一定量的冷冻保护剂(二甲亚砜或甘油)，可在深低温下如-80℃或-196℃(液氮)长期保存。
合适的气体环境
气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。氧气参与三羧酸循环，产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中。二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞生长繁殖所需成分，它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的pH值。数细胞的适宜pH为7.2-7.4，偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响。但细胞耐酸性比耐碱性大一些，在偏酸环境中更利于细胞生长。但有一些细胞也喜欢偏碱环境中生长，如成纤维细胞最适合pH是7.4-7.6。每种细胞都有其最适pH值。[2]
