爱华网(一)目的要求
通过对分离真菌用的马丁氏(Martin)培养基配制,掌握对选择培养基的配制方法,并明确选择的原理.
(二)基本原理
马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基.此培养基是由葡萄糖,蛋白胨,KH2PO4,MgSO47H2O,孟加拉红(玫瑰红,RoseBengal)和链霉素等组成.其中葡萄糖主要作为碳源,蛋白胨主要作为氮源,KH2PO4和MgSO47H2O作为无机盐,为微生物提供钾,磷,镁离子.而孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂,对真菌无抑制作用,因而真菌在这种培养基上可以达到优势生长,从而达到分离真菌的目的.
马丁氏培养基配方如下:
KH2PO4 1g
MgSO4 7H2O 0.5g
蛋白胨 5g
葡萄糖 10g
琼脂 15-20g
水 1000mL
pH 自然
此培养液1000mL加1%孟加拉红1%水溶液3.3mL.临用时每100mL培养基中加入1%链霉素液0.3mL.
(三)器材
KH2PO4,MgSO4 7H2O,蛋白胨,葡萄糖,琼脂,孟加拉红,链霉素.
试管,玻棒,铝锅,量筒,培养基分装装置,天平,药匙,高压灭菌锅等.
(四)操作步骤
1,称量和溶化按培养基配方,准确称取各成分,并将各成分依次溶化在少于所需要的水量中.待各成分完全溶化后,补足水分到所需体积.再将孟加拉红配成1%的水溶液,在1000mL培养液中加入1%的孟加拉红溶液303mL,混匀后加入琼脂加热溶化.
2,分装,包扎,灭菌及无菌检查同实验六.
3,链霉素加入由于链霉素受热容易分解,所以临用时将培养基溶化后待温度降至45℃左右时才能加入.可先将链霉素配成1%的溶液,在100mL培养基中加1%链霉素液0.3mL,使每mL培养基中含链霉素30微g.
二,马铃薯葡萄糖培养基(简称PDA培养基,培养真菌用)
(一)目的要求
通过对培养真菌用的PDA培养基配制,掌握对半合成培养基的配制方法,并明确选择的原理.
(二)基本原理
马丁氏培养基是一种用来培养真菌的半合成培养基.此培养基是由马铃薯,葡萄糖,琼脂等组成.其中马铃薯煮汁可以提供碳源,氮源,无机盐和维生素等,葡萄糖主要作为碳源,琼脂为凝固剂.马铃薯的表皮中含有龙葵碱的化学成分,对菌丝生长有抑制作用,所以马铃薯在使用时要去皮.在PDA培养基上大多数真菌都可良好生长.在PDA培养基基础上,可以添加一些其它物质,使培养基营养更为丰富和全面,真菌菌丝可以生长的更好.如综合PDA培养基就是在PDA基础上添加0.3%的KH2PO4和0.15%的MgSO47H2O以及微量的维生素B1而配制而成的.由于多数真菌喜欢偏酸性环境,而培养基灭菌过程中部分糖类会转变为酸,所以一般不需要调pH值.如果是培养对酸碱度有特殊要求的真菌,可以用稀盐酸或稀氢氧化钠调节.
PDA培养基配方如下:
马铃薯(去皮) 200g
葡萄糖 20g
琼脂 15-20g
水 1000mL
pH 自然
(三)器材
马铃薯,葡萄糖,琼脂等.
小刀,试管,玻棒,铝锅,量筒,培养基分装装置,天平,药匙,纱布,高压灭菌锅等.
(四)操作步骤
1. 马铃薯煮汁的制备
将马铃薯洗净去皮,称量200g,用小刀切成长,宽为2cm,厚度为3~5mm的土豆片,要求大小厚薄均匀.在1000mL水中煮沸15~20min,煮至无白心为止.用4~6层纱布过滤,补充水分至1000mL.
2. 葡萄糖和琼脂的称量与溶化
称取15~20g琼脂,加入土豆汁中,继续加热,并不断搅拌,当琼脂充分溶化后,加入葡萄糖,搅拌直至完全溶化.
3. 分装,加棉塞,捆把,灭菌及灭菌同前.
