爱华网在鉴定疾病状态以及治疗状态的反映这些方面，蛋白生物标记物（protein biomarker）得到广泛的应用。但是，有效的蛋白标识物的数目是有限的，尽管在过去十年付出了很大的努力去寻找显著的生物标识物（novel biomarker）,可是成功率还是非常低。生物标识物的发现研究一般用到血清和血浆，这是因为这些非常容易获得。而且，血液流动于所有的组织器官，能获得这些组织渗漏出来的蛋白，这些蛋白能标识到疾病导致的伤害。但是，发现这些低丰度蛋白标识物（low-abundance biomarker proteins）的过程常常会受到高丰度蛋白（high-abundance proteins 简称HAPs）的妨碍。血清血浆中蛋白的浓度横跨十一个数量级（span a concentration range of 11 orders ofmagnitude），其中里面20种最多的蛋白就占了总蛋白含量的97～99%。在mg/ml含量的蛋白杂质背景下去检测pg/ml的目标标识物是一个可怕的（formidable）分析挑战。
简易的净化（simplify）血清和血浆中的蛋白组方法主要是针对不同种类HAPs（specific members of the class of HAPs）进行。这是因为它们虽然数目不多，但是重量占了大多数。 清蛋白(Albumin)，就占了蛋白组50～70%的重量，它们能被假亲和（pseudo-affinity）比如Cibacron Blue chromatography*（reactive blue agarose是一种机制不很明确的亲和填料，它与很多蛋白的结合如人血清白蛋白，糖蛋白等都是特异性的（针对于它不结合的蛋白而言），有是非特异性的（能够跟很多乱七八糟的蛋白结合），所以说他是pseudo-affinitychromatographic 。我想这东西应该与paraoxonase有亲和）除去。Immunoglobulin G，占蛋白组中8～26%，能通过亲和色谱被蛋白A和蛋白G柱子除去。但是不幸的是，除去以上一种或两种蛋白时，仍然会出现难以控制的分析问题。免疫亲和色谱被认为是出去HAPs的一个可行的方法，现在免疫去除技术已有几种产品商业化。这在之前“Sample Prep Perspective”一文中已有陈述，这里就简单描述一下。这篇文章的重点主要是集中在在之前评论后出现的产品。
一步分离的产品：
在过去三年，Agilent Technologies、Sigma Aldrich、Genway Biotech(TNND，全是美国公司，两个加州，一个密苏里州)针对人体血清和血浆中HAP的去除开发了许多免疫物质。这些东西都是为了达到一步去除的，根据不同的样品，能去除最多20中HAPs。这些产品对其他哺乳动物（mammals）的血清、血浆一样起效(show cross-reactivity)。
免疫净化联用系统（multiple affinity removal system，简称MARS）：
Agilent Technologies 公司是将联用技术第一个商业化的。它是在聚合物(polymeric)的担体上结合了六种人体血清HAPs（serum albumin ,IgG,α-1-antitrypsin,haptoglobin,and IgA）的抗体。抗体通过Fc区域与聚合物结合，这样的连接能使蛋白与亲和键合点（provides easy access of protein to theaffinity binding sites）容易结合。MARS产品有色谱柱填料、萃取柱填料两种。据报道去除效率大于99%，肿瘤标记物(spiked tumor markers)的回收率为78%。在之后的产品线有加上了Human-7柱，它能去除之前的六种HAPS还加上纤维蛋白原(fibrinogen)，Mouse-3柱，专为了去除murine albumin,immunoglobulin,transferring
ProteoPrep20 血浆免疫净化试剂盒(ProteoPrep20 plasma immunodepletion kit)
这套技术是来自Sigma-Aldrich的，它有20种人体血浆HAPS的抗体组成。抗体包括多克隆的IgGs，抗体由专有的单链联接链接到担体（support）上。这产品也是有色谱柱和萃取柱两种形式。它能一次性去除98%重量的血浆蛋白，当进行二次去除时就大于99%。对20种蛋白的平均去除率为99.3%。
Seppro基于Ig-Y的免疫净化产品（Seppro IgY-based immunodepletionproduct）
Genway Biotech 开发了一系列基于avian yolk(IgY)抗体的免疫产品。这些抗体主要通过在母鸡中注入纯化的人体HAP作为抗原得出的。IgY抗体产生于蛋黄中，生产中就通过键合这些蛋白抗体的亲和色谱柱来进行纯化。之后这些抗体就连接到交联聚合物组成的担体上。每种抗HAP的IgY组合后就是免疫净化试剂，根据组合的不同，它能去除6，12或者14种HAPs。这产品能以散装、萃取柱、色谱柱的形式销售。对比基于IgG的产品，IgY能提供更多的优势：首先，IgY抗体对HAPs有更好的亲和性；其次，IgY抗体的Fc区域不会对人体蛋白进行吸收。而这是与IgG抗体的Fc区域不同，他会与其他多余的蛋白结合。由于没有交联反应使得IgY更具专一性；还有的就是，目标蛋白能容易地通过IgYs，使得它的产品可以反复使用（multiple times）；最后，由于鸟类与哺乳类之间进化的差距，IgYs比IgGs具有能广的适用性。这使得IgYs能用于其他哺乳类蛋白组比如老鼠、山羊。
ProteoSpinabundant serum protein depletion kit：
The Norgen Biotek Corp.（加拿大的公司）没有采用亲和技术，他们采用离子交换技术对HAP进行净化。
多步免疫净化产品（Multistep Immunodepletion Products）：
除了高丰度的蛋白（HAPs）,中等丰度的蛋白（MAPs）也会对低丰度的蛋白（LAPs）发生干扰。为此，Genway 通过把其IgY-12和IgY-14 HAP净化系统再结合上一支免疫净化柱子去除MAPs。这根柱子就叫SuperMix。
通过与Agilent 7- antibody和Genway IgY-14这些一步净化的产品比较，两步净化程序有更好的净化效率。
肽免疫亲和的蛋白质净化（Protein Depletion Using PeptideAffinity）：
基于抗体产品免疫净化有两个不足之处：首先，洗脱的过程样品会被稀释；其次，当需要得到更多的其他目标蛋白组时，需要扩展免疫净化技术。解决方法之一就是利用结合了六肽（hexapeptides）色谱分离技术。这技术由加州的Bio-Rad 实验室开发，它在有效净化HAPs的同时克服了免疫净化的缺点。产品以萃取柱为主，对比基于抗体免疫的产品，100ul的填料体积能容纳超过1ml的样品，过量的HAPs直接通过，没有保留。样品上样、淋洗后用小于300ul的洗脱缓冲液进行洗脱。结果就是HAPs的去除和至少三倍浓度提高的LAPs，回收率为99.6%，去除率为96%。
结论：
当前已有许多的蛋白净化产品成功商业化，它们能大大简化蛋白标识物的净化任务。它们的大部分都是一步的基于抗体的免疫净化产品，能去除最多14种人体血清血浆中的高丰度蛋白。近来多步免疫净化产品还有肽亲和技术都有很好的潜力，它们都能很好地与拥有显著蛋白标识物的蛋白组结合（reachingthat segment of the proteome where noval biomarkers are hoped toreside）。
