转基因生物新品种培育 转基因生物新品种培育 转基因鸡的培育案例和培育方法介绍

【导读】转基因鸡英国科学家正在培育抗H5N1型禽流感病毒的转基因鸡,以应对这种高致病性病毒对人类社会的长期威胁。这项研究由剑桥大学和苏格兰罗斯林研究所的科学家负责。科学家们已经通过添加遗传物质片段的方法,使鸡细胞具备了抵抗H5N1型禽流感病毒的能力。

这项技术如果经实验证明成功,还可以用来培育抗其他类型禽流感病毒的转基因鸡,下面我们一起来看看转基因鸡的培育案例和培育方法介绍。

    转基因鸡的培育案例和培育方法介绍

    美国

    美国乔治亚大学和AviGenics公司与主办第1届国际转基因动物学术研讨会秘书长中科院曾邦哲1996年的通信中得知转基因禽类输卵管生物反应器的研究之后,启动了该研究项目,2002年4月1日在英国《自然生物技术》杂志4月刊上撰文宣布,他们在家禽转基因研究领域获得突破性进展,已培育出能产下含人体所需蛋白质的转基因鸡蛋的克隆鸡。由公司科学家亚历克斯·哈维领导的研究小组将一种细菌的基因片段改造后导入鸡胚胎,培育出了可充当β内酰胺酶制造器的转基因鸡。他们先用这种技术对546个孵卵鸡蛋进行处理,孵化出了126只小鸡,其中10%携带新基因;然后将携带高水平β内酰胺酶基因的精子和卵子匹配,培育出了能有效遗传父母新基因特性的后代。连续遗传几代后,就培育出能产含药物成份的转基因鸡蛋的母鸡。

    研究人员说,由于转基因鸡从孵化到长成的时间比转基因奶羊和奶牛都短得多,从孵化成鸡到能下蛋只需7个半月,因此有可能成为一种更快速和更丰富的生物制药来源,用来生产治疗从失血到癌症,从囊肿性纤维化到糖尿病等多种疾病的各种药物。

    中国

    上海出现了全国第一家转基因鸡产业开发公司在全国率先开发通过鸡蛋蛋清表达外源基因的技术。

    其主要成果在于:构建了能在鸡蛋蛋清中表达外源基因的表达载体;建立了有效的轩基因技术,转基因效率在30%至70%之间;在20%以上的转基因鸡所产的鸡蛋蛋清中检测到了实验用的外源基因“人瘦素蛋白”,其中最高表达量在每升蛋清中含10毫克至30毫克。

    这一技术稳定后,有几种产业开发的可能:一是改良鸡的种质品质,培育出高生长速度、抗病毒、产低胆固醇蛋的转基因鸡品系;二是利用鸡蛋蛋清作为生物反应器,在蛋清中生产有药用价值的蛋白质多肽,如人高密度脂蛋白、人血清白蛋白等各种细胞因子、疫苗和抗体。市场上将出现真正具有防心血管病、抗癌等效用的“营养蛋”、“保健蛋”。

    按照国家《农业转基因生物安全管理》规定,相关技术需进行安全性评价,在取得安全证书后,才能进入生产。

    培育

    通过显微注射生产转基因鸡

    (l)单细胞受精卵显微注射法。人们发现,当外源DNA注射到海胆、斑马鱼和爪蟾等脊椎动物受精卵细胞质中,当卵快速分裂时,外源DNA能暂时停留染色体外复制,并可低频率地结合到染色体基因组中。得益于上述研究的启示,在体外将外源基因注射到单细胞受精卵细胞质中,经过体外培养后,成功地产生了转基因鸡。但是,此种方法取到一个受精卵需要一只母鸡,若操作失败,一个细胞的损失就相当于一只母鸡的损失,成本较高,并且受精卵体外孵化条件也很复杂,操作难度较大。

    (2)受精卵原核注射法。在国内,李赞东等将脂质体包装后的质粒pMiwz(含有报告基因LacZ)注入囊胚期胚盘中,转基因获得成功,并证明囊胚期注射外源基因可以获得转染的原生殖细胞(PGCs),并能够传给下一代。在国外,Jamielove等将带有目的基因质粒DNA注射入鸡受精卵的胚胎中,体外培养12h后发现近一半存活,40%胚胎中含有质粒DNA,有6%相当于每一个细胞含有1个拷贝的外源基因,7只存活至性成熟雏鸡中的一只将3.4%外源基因传递给其后代。此种方法可以得到转基因嵌合体鸡,但转基因细胞的嵌合部位和嵌合程度不容易确定。

    鸡卵原始胚细胞的弹道转染

    该技术最初应用于植物细胞的转基因操作,其中包括两大组成部分:离子加速系统和离子包装系统。此种方法效率较高,并且由于用的是不同大小的钨离子,而且胚胎新月区下主要是卵黄蛋白,所以不必考虑投射弹的速度和穿入的深度(白占涛等,2000)。但是,由于此方法导入的DNA很难整合到鸡的基因组中,故遗传稳定性和传代性不强。

    逆转录病毒载体法

    此法是利用病毒正常生命周期特征来感染家禽,从而导入外源并达到整合的目的。现在使用的病毒载体有两类:复制完全型和复制缺陷型(高波,2000)。复制完全型逆转录病毒包含全部结构基因能自我复制,并能重复感染细胞。而复制缺陷型逆转录病毒缺乏部分或全部结构基因,不能自我复制,需在辅助细胞中繁殖。反转录载体法的整合效率比电穿孔和脂质体转染法要高,但是由于基因片段大小的限制和获得高滴度病毒有困难,所以目前主要停留在实验室阶段,还未广泛应用于商业生产(刘向萍,2003)。

    精子载体法

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    这种方法利用精卵结合的正常生理过程来完成外源基因的导入,具有简便易行,对卵原核无损伤等特点,但对精子的损伤是十分棘手的问题,并且整合度也不高。

    (1)脂质体介导精子载体法。在国内,杜立新等曾对此方法作过探讨,其大体实验步骤包括:脂质体-DNA复合的制备,mDm-His法获能精子的人工授精、转基因鸡的检测。发现的问题是精子活力下降、外源基因表达率随胚胎发育而降低等问题。

    (2)精子细胞电穿孔法。电穿孔法是促进DNA与动物精子结合的一种重要方法。它利用高压电场使精子质膜产生暂时性孔洞,从而使外源DNA比较容易地进入细胞内。钟家玉研究发现,先让精子脱水再水化或者对浸浴在外源基因中的精子进行电脉冲,得出的阳性率都比仅仅将外源基因和精子混合大得多。先脱水再置于低渗液,精子会吸入低渗液,而正是这一过程使阳性率大大提高,外源基因非常可能随着低渗液进入精子。

  

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