爱华网维生素K3的安全性评价
化学药物刺激性、过敏性和溶血性概述
化学药物制剂经眼、耳、鼻、口腔、呼吸道、关节腔、皮肤、 直肠、阴道、静脉、动脉、肌肉、皮下、静脉旁和鞘内等非口 服途径给药，对用药局部产生的毒性（如刺激性和过敏性等） 和/或对全身产生的毒性（如过敏性和溶血性等）。它是临床前 安全性评价的组成部分。 药物的活性成分及其代谢物、辅料、有关物质及理化性质 （如pH值、渗透压等）均有可能引起刺激性和/或过敏性和/或 溶血性的发生，而严重的毒性可以影响用药的安全有效性，因 此药物在临床应用前应研究其制剂在给药部位使用后引起的局 部和/或全身毒性，以提示临床应用时可能出现的毒性反应、毒 性靶器官、安全范围、临床研究监测指标并为临床解毒或解救 措施提供参考，保障临床用药的安全有效。
实验项目
1.刺激性（皮肤刺激性试验；眼刺激性试验；注射给药部位刺
激性试验：血管刺激性实验、肌肉刺激性实验。） 2.过敏性 3.溶血性实验 试验设计应遵循随机、对照、重复的原则。 试验用药物应与用于人体的制剂一致 观察部位应选择给药部位，同时 考虑选择周围组织或可能暴露于 受试药物的部位。
刺激性试验
刺激性是指非口服药物制剂给药后对给药部位产生的可逆性炎
症改变，若给药部位产生了不可逆性的组织损伤则称为腐蚀性。
【实验目的】
观察动物局部接触受试物后所产生的刺激反应，提示药物 临床应用后给药部位可能出现的炎症反应、组织的变性和 坏死等不良反应。
刺激性试验设计中应考虑的问题
⒈实验动物的选择 依据观察指标和拟采用试验模型选择试验 动物，一般每个试验选择一种动物进行评价。 ⒉给药的频率与期限 给药频率和期限应依据拟定临床应用的 情况来决定。重复给药试验，一般每天给药一次，给药期 限最长不超过4周。偶尔给药的受试物可用单次给药的方 法进行试验。 ⒊可逆性观察-www.wenzhangwo.com- 为明确毒性反应的恢复情况，建议进行停药后 恢复期的观察。局部毒性反应的可逆性评价应包括局部及 相关部位的反应。
刺激性试验设计中应考虑的问题
⒋受试物 受试物应与用于人体的制剂一致。 ⒌对照组 以溶媒和/或赋形剂作为阴性对照。必要时采用阳性 对照或已上市制剂。 ⒍剂量 剂量设计主要应该考虑受试物浓度和总剂量。一般采 用与临床制剂相同浓度，设一个剂量组，可以通过改变给 药频率进行剂量的调整，但皮肤给药刺激性研究通过增加 涂敷厚度或加大涂布面积来提高给药剂量是不合适的。必 要时应该进行不同浓度的刺激性试验。
刺激性试验设计中
应考虑的问题
⒎给药方式 7.1给药方案应尽量与临床用药方案一致。 7.2给药途径和给药部位应与临床用药一致。 7.3设计给药容积，给药速率和给药频率时，应考虑所选用动 物模型给药部位的解剖和生理特点。 ⒏只要相互之间不影响且全身耐受性许可，则可在同一动物 身上进行不同给药途径的刺激性试验研究，并可在对侧进 行对照试验。
刺激性试验
皮肤刺激性试验
皮肤刺激性是指动物经皮肤给予受试物后在皮肤上产生的可逆 性炎症改变，若产生了不可逆性的组织损伤则为皮肤腐蚀性。
目的 观察动物皮肤接触受试物后所产生的刺激反应，提示药物
临床应用后皮肤可能出现的炎症、组织变性和坏死等不良反应。
皮肤刺激性试验
试验方法 试验动物：首选家兔，动物数4－8只，雌、雄各半。应设赋形 剂对照，采用同体左右侧自身对比法。试验前24小时对给药区
（通常在背部）进行脱毛处理（可剪、剃或用适宜的脱毛剂）。 去毛范围左、右各3cm×3cm。给药前应检查去毛皮肤是否因去 毛而受损伤，有损伤的皮肤不宜进行试验。但若需考察破损皮
肤的刺激性，则可在用药部位用砂纸磨或划“井”字并以渗血
为度。
皮肤刺激性试验
试验方法
受试物的给予：取受试物0.5 ml直接涂布于一侧已去毛的皮肤上，
然后用二层纱布（2.5 cm×2.5cm）和一层玻璃纸或类似物覆盖，
再用无刺激性胶布和绷带加以固定 ；另一侧涂布赋型剂做对照。 贴敷时间至少4小时。贴敷结束后，除去受试物并用温水或无刺 激性溶剂清洁给药部位。多次给药皮肤刺激性试验应连续在同
一部位给药，每次给药时间相同，贴敷期限一般不超过4周。
皮肤刺激性试验
试验方法 动物观察：在自然光线或全光谱灯光下观察皮肤反应。单次给 药皮肤刺激性试验，在去除药物后30-60分钟，24、48和72小时 肉眼观察并记录涂敷部位有无红斑和水肿等情况。对出现中度 及以上皮肤刺激性的动物应在观察期结束时对给药局部进行病 理组织学检查。
刺激性试验
眼刺激性试验
眼刺激性是指动物经眼给予受试物后在眼前部表面产生的可逆 性组织改变，若产生了不可逆性的组织损伤则为腐蚀性。 。
目的 观察动物经眼给予受试物后所产生的刺激性反应，提示药
物临床应用后眼可能出现的炎症、组织变性和坏死等不良反应。
眼刺激性试验
试验方法
试验动物：首选家兔，动物数每组不少于3只。应设置生理盐水
对照组，可采用同体左右侧自身对比法。试验前24小时内对每
只动物的双眼进行检查（包括使用荧光素钠检查）。有眼睛刺 激症状、角膜缺陷和结膜损伤的动物不能用于试验。
眼刺激性试验
给药方法：每只眼睛滴入0.1ml或涂敷0.1g受试物，然后轻合眼 睑约10s。一般不需冲洗眼睛。用药周期应根据药物拟用于临床 的情况来决定，多次给药一般不超过4周。
眼刺激性试验
眼部观察：单次给药眼刺激试验，在给药后1、24、48和72小时 对眼部进行检查；多次给药眼刺激试验，每天给药前以及最后 一次给药后1、24、48和72小时对眼部进行检查。如果在72小时 未见任何刺激症状，试验则可结束。如存在持久性损伤，有必 要延长观察期限。但一般不超过21天。
溶血性试验
溶血性是指药物制剂引起的血管外或血管内溶血和红细胞凝聚 等反应。溶血性反应包括免疫性溶血与非免疫性溶血。免疫性 溶血是药物通过免疫反应产生抗体而引起的溶血，为Ⅱ型和Ⅲ 型过敏反应；非免疫性溶血包括药物为诱发因素导致的氧化性 溶血和药物制剂引起血液稳态的改变而出现的溶血和红细胞凝 聚等。
注射给药部位刺激性试验
注射给药部位刺激性是指动物经注射给予受试物后在注射部位 产生的可逆性组织改变，若产生了不可逆性的组织损伤则为腐 蚀性。 目的 观察动物注射受试物后所产生的刺激性反应，提示药物临 床应用后注射部位可能出现的炎症、组织变性和坏死等不良反 应。
注射给药部位刺激性试验
试验方法
1.试验动物：首选家兔，动物数每组不少于3只。应设生理盐水
对照，可采用同体左右侧自身对比法。用 药部位根据药物的给 药途径确定，可选用耳缘静脉，耳中心动脉（其它动物可选用 静脉旁组织等。 2.给药方法：按临床使用情况给予受试物，给药容积和速率应 根据动物情况进行相应的调整。给药期限应根据药物拟用于临 床的情况来决定，多次给药一般不超过7天。
前、后肢静脉及股动脉等），股和背部肌肉，侧胸壁皮下组织，
注射给药部位刺激性试验
试验方法
3.动物观察：单次给药刺激性试验，在给药后48-96小时对动物
和注射部位进行肉眼观察；多次给药刺激性试验，每天给药前
观察期结束时应对部分动物进行给药部位组织病理学检查。留
以及最后一次给药后48-96小时对动物和注射部位进行肉眼观察。
下的动物根据受试物的特点和刺激性反应情况，继续观察14－
21天再进行病理组织学检查，以了解刺激性反应的可逆程度。 4.结果评价：根据肉眼观察和病理检查的结果，对受试物使用 的安全性进行评价。
家兔股四头肌法
实验材料
器材：注射器 1ml 5支。 药品：维生素K3注射液、生理盐水。 动物：2.0～2.2 kg家兔4只，雌雄各半。
方法与步骤
取家兔4只,每只家兔一侧股四头肌内注射维生素K3注射液 1 ml，另一
侧注射同体积生理盐水。注射后观察注射部位肌肉
有无充血、水肿等反应, 注射后48 h后用空气栓塞法处死动物，
解剖取出股四头肌，纵向切开，观察注射部位肌肉的刺激反应，
按肌肉刺激反应分级标准计算相应的反应级，并进行局部组织
病理学检查，提供病理照片。
实验结果与讨论
实验结果与讨论
【结果与讨论】
根据肉眼观察和组织病理学检查的结果进行综合判断。
家兔耳壳法
是注射剂刺激性初试的一种方法。因家兔耳壳较薄，将药物注 射于耳壳皮下后，其刺激性反应易于在透光检查中发现，而不 需处死动物，试验成本相对较低。
实验材料
器材：注射器 1ml 5支。 药品：维生素K3注射液、生理盐水。 动物：2.0～2.2 kg家兔4只，雌雄各半。
方法与步骤
另一侧注射同体积生理盐水。注射48 ～96 h后观察注射部位肌
取家兔4只，每只家兔一侧耳缘静脉内注射维生素K3注射液1ml，
肉有无充血、水肿等反应, 观察结束后用空气栓塞法处死动物，
进行给药部位组织病理学检查，并提供病理照片。 【结果与讨论】
根据肉眼观察和组织病理学检查的结果进行综合判断。
溶血性试验
目的 考察药物是否能够引起血管外或血管内溶血和红细胞凝 聚等反应。 凡是注射剂和可能引起免疫性溶血或非免疫性溶血反应的 其他药物制剂均应进行溶血性试验。
溶血性试验
溶血性试验方法 1、常规的体外试管法(肉眼观察法)
1.1 血细胞悬液的配制
取兔血(或羊血)数毫升,放入含玻璃珠的三角烧瓶中振摇 10 分钟 ,或用玻璃棒搅动血液,除去纤维蛋白原,使成脱纤血液.加入 0.9% 氯化钠溶液约10 倍量,摇匀,1000-1500r/min 离心 15 分钟,除去上 清液,沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤 2-3 次,
至上清液不显红色为止.将所得红细胞用0.9%氯化钠溶液配成
2%的混悬液,供试验用.
溶血性试验
溶血性试验方法 1、常规的体外试管法(肉眼观察法)
1.2 受试物的制备
除另有规定外,临床用于非血管内途径给药的注射剂,以各药品使 用说明书规定的临床使用浓度,用0.9%氯化钠溶液 1∶3 稀释后 作为供试品溶液;用于血管内给药的注射剂以使用说明书规定的 临床使用浓度作为供试品溶液。
溶血性试验
溶血性试验方法 1、常规的体外试管法(肉眼观察法) 1.3 试验方法 取洁净试管 7 只,进行编号,1-5 号管为供试品管,6 号管为阴性对 照管,7 号管为阳性对照管.按下表所示依次加入 2%红细胞悬液、 0.9%氯化钠溶液或蒸馏水,混匀后,立即置 37℃±0.5℃的恒温箱 中进行温育,开始每隔 15 分钟观察 1 次,1 小时后,每 隔 1 小时观 察 1 次,一般观察 3 小时.
按下列顺序加入各种溶液
溶血性试
验
结果观察 若试验中的溶液呈澄明红色,管底无细胞残留或有少量红细 胞残留,表明有溶血发生;如红细胞全部下沉,上清液体无色澄明, 表明无溶血发生.若溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀,振摇后不 分散,表明有红细胞凝聚发生.如有红细胞凝聚的现象,可按下法
进一步判定是真凝聚还是假凝聚.若凝聚物在试管振荡后又能均
匀分散,或将凝聚物放在载玻片上,在盖玻片边缘滴加 2 滴0.9% 氯化钠溶液,置显微镜下观察,凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚,
若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为真凝聚.
溶血性试验
溶血性试验
结果观察 分光光度法： 肉眼观察结束后，将各管的溶液置入离心机1500rpm离心15min， 取上清液，在紫外可见分光光度计545nm波长处，以蒸馏水为 空白，测试各管吸光度值。用下式计算各试验管的溶血率 （%）。 溶血率（%）=（ODt-ODnc）/（ODpc-ODnc）×100% 式中：ODt：试验管吸光度 ODnc：阴性对照管吸光度 ODpc：阳性对照管吸光度 观察指标及时间： 观察加入2%兔红细胞悬浮液15min，30min，45min和1h， 2h，3h后的溶血或凝聚情况；紫外可见分光光度计测试各管吸 光度值，计算各试验管的溶血率（%）。
溶血性试验
结果判断 肉眼观察：当阴性对照管无溶血和凝聚发生,阳性对照管有溶血
发生时,若受试物管中的溶液在 3 小时内不发生溶血和凝聚,则受
试物可以注射使用;若受试物管中的溶液在 3 小时内发生溶血和 (或)凝聚,则受试物不宜注射使用。
分光光度法：若供试品溶血率＞5%表明出现了溶血，供试品不
宜临床注射使用。
溶血性试验
谢谢大家！
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