第39卷第6期
日用化学工业
鱼坐呈呈璺!些兰!竺!里!堡曼竖坐壁垦!兰竺!垒竺
v01.39No.6
1竺!!!星里竺:!竺
高效液相色谱法检测化妆品中儿茶酚胺类药物的残留量
吴延晖,许泓,肖亚兵,何佳,张骏,林安清,张曼
一
’(天津出入境检验检瘦局,天津300201)
摘要:采用高效液相色谱法,研究检测了化妆品中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的残留量。得到的色谱条件:
w砷ersAn蛐tis
c18柱(5岬,250聊x4.60哪)为分析柱,流动相y(甲醇):矿(O.02
moL/L磷酸二氢钾溶液)=4:96,荧
光检测器检测,激发波长为285舳,发射波长为340
99.4%,RSD为3.6%一6.1%(n=8)。
nm。结果表明,肾上腺素、去甲肾上腺素在O.025mg/L~2.5mg/L
内,异丙肾上腺素在0.05mg/L~5.Omg/L内,其峰面积与质量浓度呈良好的线性关系。该方法回收率为95.6%~关键词:化妆品;肾上腺素;去甲肾上腺素;异丙肾上腺素;高效液相色谱法中图分类号:TQ658
文献标识码:A
文章编号:100l—1803(2009)06一0439一03
DeterminationresidualcatecholaminesincosmeticsbyHPLC
WUYan—hui,XUHong,ⅪA0Ya—bing,HEJia,ZHANGJun,LINAn—qing,ZHANGMan
(7rianjinEn田一E妣In8pection卸dQu卸mntineBuI船u
of
chi∞,Tianjin30020l,China)
Abstract:A
HPLCmethodforme
dete加ination
with
theresidualofcatech01amines
extract
including
on
epinephrine,
norepinephrineandisoprenalineincosmeticsw舶established.The
was
analyzed
WatersAtlantisC1置
moL/L
detectorwith
column(5斗m,250
mm×4.60
mm)
=
mobilephaseconsisted
of
y(methan01):y(0.02
bvnuorescence
as
monopotassiumphosphatesolution)
4:96.Thedetectionwasconducted
excitationwavelen甜hof285
nm锄d
emissionwavelen甜hof340nm.tIle
range
Resultsshowedthattheconcentrationconcentration
and
ofthe
ofepinephrine,norepinephrineisi80prenalineis
inthe
range
inof0.025
mg/L~2.5mg/L,andthe
between
of0.05
m∥L~5.0m∥L,tllerelationship
concentration
con.espondingpeakarea幽0_ws鼬odlineaIity.Therecoveryachieve895.6%一99.4%.TheRSDoftllemethodis3.6%一6.1%(凡=8).
Keywords:cosmetics;epinephrine;norepinephrine;isoprenaline;HPLC
肾上腺素、去甲肾上腺素和异丙肾上腺素被称为儿茶酚胺类(cAs)药物,化妆品中添加一种或一种以上这些物质能防止皮肤老化,有除铍、增加皮肤弹性等作用,但是过量使用会影响中枢神经系统和心肾等主要脏器的血液循环,出现各系统缺血症状和功能损害。欧盟2008年执行新的化妆品卫生标准,规定此类药物为禁用物质。我国卫生部印发的《化妆品卫生规范》(2007年版),修订了化妆品禁限用物质名单中共有禁用物质l286种,其中包括这3种化合物。常用的儿茶酚胺检测方法有荧光法、放射酶学法、电分析化学
法、毛细管电泳法、化学发光分析法、色质联用法和高效液相色谱法等¨3】,而检测的对象多为血液、组织液
等。为了提高化妆品产品质量,有必要建立一种同时检测化妆品中这3种禁用药物的方法。1
实验部分
1.1试剂与仪器
盐酸肾上腺素(E)标准品、去甲肾上腺素(NE)标准品和盐酸异丙肾上腺素(ISOE)标准品,Dr.
收稿日期:2009一01—09;修回日期:2009一09一03
作者简介:吴延晖(1969一),女(汉),浙江人,高级工程师,硕士,电话:(022)28375869。
?439?
万方数据
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》析与检澳e
日用
化Ehrensto疵rGmbH公司;磷酸二氢钾,分析纯,天津市天大化工厂;甲醇,色谱纯,德国Merck公司。高效液
相色谱仪(配有waters515HPLC泵,Waters717自动进样器,Waters470荧光检测器),美国Waters公司;超声波清洗仪,上海医用仪器厂;1/100000
R200D分析
天平,德国Sartorius公司。
1.2实验方法
1.2.1色谱条件
色谱柱:waters
Atlantis
C18柱(5“m,250
mm×
4.60
mm);流动相:y(甲醇):y(O.02moL/L磷酸二氢
钾溶液)=4:96;检测器:荧光检测器,检测波长为激发波长285
nm和发射波长340
nm;流速:
1.2
mL/min;进样量:20肛L;室温。
1.2.2标准溶液及供试溶液的制备
分别准确称取适量盐酸肾上腺素、去甲肾上腺素、
盐酸异丙肾上腺素(精确到O.1mg),以甲醇溶解、定容,配制成质量浓度分别为0.1g/L的标准储备溶液(去甲肾上腺素需先用l
mLO.01
moL/L盐酸溶解,然
后以甲醇定容)。分别移取一定体积的上述标准储备液至10mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配成一系列标准溶液。
精确称取化妆品试样约lg(精确到0.01g)于具塞离心管中,加甲醇定容至10mL,于冰水浴中超声提取20min,离心分离,取上清液以O.22¨m滤膜过滤,供高效液相色谱仪检测用。
2结果与讨论
2.1化妆品试样提取方法的选择
此类药物分子结构中具有烃氨基侧链,其氮为仲胺氮,因而显弱碱性,其游离碱易溶于有机溶剂,其盐可溶于水,并且分子结构中具有邻苯二酚结构,露置空气中或遇光和热易氧化,在碱性溶液中更容易变色。根据以上特性,为了获得尽可能高的提取效率并且减少操作步骤,选用甲醇作为提取溶剂,为了避免水浴温度高使药物氧化,采用水浴中加冰块的方法对样品进行提取。
2.2色谱条件的选择【4“J
2.2.1色谱柱的选择
所测物质在水溶液中具有较高溶解性,造成在一般反相色谱柱上保留行为较弱。经选用多种不同牌号的C。8柱实验比较,Waters—AtlantisC18柱对极性化合物保留能力强,在含水极高的流动相中性能仍稳定,实
?440?
万方数据
学
工业
第39卷
验后纯水反复冲洗,被测物仍有较好的保留,即无“疏水塌陷”现象,即使在低pH条件下色谱柱寿命相对仍较长,色谱峰形对称,重现性好,其分离效果见图l。由图l可知,去甲肾上腺素保留时间为2.910min,肾上腺素保留时间为3.64lmin,异丙肾上腺素保留时间为12.038
min。
2.9lO
,
n38
.64l
姨.
。
一
一
O
2
4
6
8
1012141618
∥min
图1去甲肾上腺素、肾上腺素和异丙肾上腺素标准溶液色谱图
Fi昏1
St锄dard
chlDma“'gmphof
norepinep陆ne,epinep¨rle
and
is叩renaline
2.2.2流动相的选择
如果流动相中加入离子对,试剂不仅费用较高,而且分析完成后色谱柱需较长时间清洗才能干净。实验选用价廉的磷酸二氢钾作为流动相,获得了较好的分离效果,不仅降低了成本,同时也延长了色谱柱的使用寿命。实验发现流动相中有机溶剂比例的大小对待测物保留时间影响很大,甲醇浓度太低容易造成最后的物质出峰时间晚并且峰形展宽,浓度过高保留时间明
显缩短,但是造成峰重叠,因此根据样品分离情况确定
甲醇占流动相的体积分数为2%~4%较为合适,实验选用4%。
2.2.3检测器的选择及检测波长的确定
荧光检测器的灵敏度较高,特异性好,故选用荧光检测器。通过定性扫描,确定较佳荧光激发波长为
285
nm,较佳发射波长为340
nm。‘
2.3线性范围及检出限
移取0.1g/L的标准储备液1mL至10mL容量
瓶中,用甲醇稀释至刻度,准确移取标准溶液25汕,
50¨L,0.5mL,lmL,5
mL至lOmL容量瓶中,用甲醇
稀释至刻度,摇匀后在设定色谱条件下,测定不同质量浓度混合标准溶液,肾上腺素和去甲肾上腺素在
0.025mg/L~2.5
mg/L内呈线性关系,异丙肾上腺素
在0.05mg/L~5.0mg/L内呈线性关系,线性方程和相关系数见表l。
箜!塑
墨垄堕笠!壶墼鎏塑鱼鲎鲞坌型垡鉴曼主』!苤墼壁耋堕塑箜丛宣量》奇析与检漓:
表l线性方程和相关系数
Tab.1
“nearequations卸dcon.elationcoemcients
空白基质溶液色谱图及空白基质加入各检出限标准品的回收色谱图见图2。从图2可以看出,空白基质对这3种物质的检测无干扰。用该方法检测化妆品试样中盐酸肾上腺素、去甲肾上腺素和盐酸异丙肾上腺素检出限质量浓度分别为o.05mg/L,o.05mg/L和
m∥L。
2.909
^-—~—一—一~^-小^,¨—一——^—‰一一~一"~■;篙蜀斋
O
2
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∥min
图2空白基质及加标样后色谱图
Fi昏2
Chr0瑚tography
of
blaIll【substrate锄d
sub8tmte
wim
additi∞ofstalldardc叩tentof印inephrine,
norepinep硒ne彻d
isopl℃naline
在线性范围内,向空白基质中分别添加去甲肾上腺素、肾上腺素和异丙肾上腺素,按照2.1检验方法测定加标回收率,结果见表2。由表2可知,8次实验结果的回收率在95.6%一99.4%;相对标准偏差在
3.6%一6.1%。
表2
3种药物加标回收率及精密度实验(n=8)
Tab.2
Recovery
test蚰d
precision
test
results(n=8)
万方数据
2.5样品测定
按样品处理方法及色谱条件,对3种化妆品中肾上腺素、去甲肾上腺素和异丙肾上腺素进行相对含量测定,测定结果见表3。
表3样品测定结果(n=4)
Tab.3Resultsof
arIalysi昌0fcosmeticproducts啪pIes(n=4)
3
结论
样品前处理采用甲醇超声提取,利用高效液相色
谱仪进行分析检测,色谱峰重现性好,分离速度快,方
法简便。加标回收率为95.6%一99.4%,RSD为3.6%一6.1%(n=8)。对提高化妆品质量,较好地应用于化妆品的监督工作,为化妆品评审检验和卫生监督提供了有效的测试手段。
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?441?
O.1
2.4回收率及精密度实验
高效液相色谱法检测化妆品中儿茶酚胺类药物的残留量
作者:
作者单位:
刊名:
英文刊名:
年,卷(期):
被引用次数:吴延晖, 许泓, 肖亚兵, 何佳, 张骏, 林安清, 张曼, WU Yan-hui, XU Hong,XIAO Ya-bing, HE Jia, ZHANG Jun, LIN An-qing, ZHANG Man天津出入境检验检疫局,天津,300201日用化学工业CHINA SURFACTANT DETERGENT & COSMETICS2009,39(6)0次
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,SpO2、血压、脉搏亦逐恢复正常,25分钟后病情稳定,手术经过顺利.6.期刊论文 刘桂芳 复方甘草甜素致过敏反应二例 -
中国药物与临床2005,5(10)
例1女性,23岁.主因"使用化妆品后面部出现斑疹,瘙痒1周"于2005年1月22日来我院就诊.患者既往无药物过敏史.经诊断为接触性皮肤炎.给予复方甘草甜素(compound glycyrrhizic acid,商品名:美能,日本米诺发源制药株式会社,批号为00444)40 ml加入5%葡萄糖注射液250 ml[阿拉宾度同领(大同)药业有限公司,批号为041202]中静脉滴注,用药约30 min后,患者出现头痛、头胀、呼吸困难、面色苍白.查体:血压70/50 mm Hg,脉细弱.立即停药,给予静脉注射地塞米松5 mg、肌肉注射肾上腺素1 mg、静脉滴注5%葡萄糖氯化钠注射液250 ml,30 min后症状逐渐缓解,面色转红,呼吸通畅,自觉症状好转.查体:血压90/60 mm Hg,脉搏70次/min,呼吸18次/min,约3 h后患者基本恢复正常.
7.学位论文 惠锦 二十八烷醇抗缺氧效应的初步研究 2007
平原人进入高原低氧环境后,劳动能力和工作效率下降,部分人可因习服不良发生高原病,严重者甚至危及生命。因此,寻找有效的促高原低氧习服措施,提高高原居民在高原低氧环境中的生活质量和劳动能力,促进其低氧习服过程,减少高原病的发生率和病死率,成为高原医学研究的重点和前沿。采用药物促进高原习服、防治高原病简便易行、可行性高,相关人员一直致力于抗缺氧药物的寻找。乙酰唑胺、地塞米松、茶碱等药对高原缺氧症状有一定缓解作用,但副作用较大限制其实际使用。枸杞子、银杏叶、人参等药食两用原料为主要成分制作的耐缺氧食品添加剂可以显著延长缺氧动物存活时间,降低进入高原部队急性高原病的发生率,提高高原劳动能力,但资源较少且价格昂贵,也不利于其推广使用。
二十八烷醇(1-Octacosanol)是天然存在的高级脂肪醇,广泛分布于动物的表皮和内脏、昆虫分泌的蜡质、以及植物根、茎、叶、壳、籽仁的脂质中,来源广泛,无副作用,目前作为天然健康食品添加剂和广谱天然良药,已被用于运动饮料、天然保健品、药品和化妆品等领域。研究表明,二十八烷醇具有多种生理功能,包括抗运动性疲劳,增强耐力、精力和体力、降血脂、预防心血管疾病、抗血小板聚集、细胞保护作用以及对心脏和大脑缺血有保护作用等,提示二十八烷醇可能成为一种有效的耐缺氧食品,但有关其抗缺氧效应的研究迄今国内、外均未见报道。因此,本研究从以下三方面观察了二十八烷醇的抗缺氧作用,并初步探讨其作用机制:
1.建立常压密闭缺氧、亚硝酸钠中毒、大脑缺血缺氧和心肌缺氧4种缺氧动物模型,观察了二十八烷醇对不同类型急性缺氧小鼠存活时间的影响;
2.建立慢性减压缺氧30d大鼠模型,检测动脉血气、血常规、左、右心室血流动力学指标、右心室重量指数,观察心脏和肺血管形态结构改变;
3.建立慢性缺氧30d大鼠模型,采用六道动物跑台,观察二十八烷醇对慢性缺氧大鼠运动耐力的影响,检测心肌和骨骼肌线粒体呼吸功能、ATP合成速率和ATP分解速率。
结果发现:
1.给予10mg.kg-1和50mg.kg-1二十八烷醇灌胃小鼠密闭缺氧存活时间显著高于对照组,存活时间分别比对照组增加了21.11%和26.46%,其差异非常显著(P<0.01);100mg.kg-1二十八烷醇灌胃小鼠亚硝酸钠中毒存活时间与对照组相比没有显著性差异(P>0.05);给予50mg.kg-1二十八烷醇灌胃小鼠断头处死张口动作持续时间和注射异丙肾上腺素后密闭缺氧存活时间显著高于对照组(P<0.05);
2.给予5mg.kg-1二十八烷醇灌胃慢性缺氧大鼠动脉血氧分压(PO2)、血氧饱和度(SO2)、乳酸(Lac)、红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)与对照组相比无显著性差异(P>0.05),平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)显著高于对照组(P<0.01),红细胞压积(HCT)、红细胞平均容积(MCV)、红细胞平均血红蛋白量(MCH)、红细胞分布宽度标准偏差(RDW-SD)、红细胞分布宽度变异系数(RDW-CV)显著低于对照组(P<0.01);
3.给予5mg.kg-1二十八烷醇灌胃慢性缺氧大鼠右心室重量指数(RVWI)显著低于对照组(P<0.05),右室收缩压(RVSP)、右室舒张末压(RVEDP)、肺动脉收缩压(PASP)、肺动脉舒张压(PADP)、肺动脉平均压(MPA)和右室压力上升(或下降)最大速率(±dp/dtmax)均显著低于对照组(P<0.05),两组动物左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、主动脉压(AP)和左室压力上升(或下降)最大速率(±dp/dtmax)没有显著差异(P>0.05);
4.给予5mg.kg-1二十八烷醇灌胃慢性缺氧大鼠运动力竭时间显著高于对照组(P<0.01),心肌线粒体Ⅳ态呼吸(ST4)显著低于对照组(P<0.01),呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O)、ATP合成速率显著高于对照组(P<0.05),两组动物心肌线粒体Ⅲ态呼吸ST3和氧化磷酸化效率(OPR),骨骼肌线粒体Ⅲ态呼吸(ST3)、线粒体Ⅳ态呼吸(ST4)、呼吸控制率(RCR)和氧化磷酸化效率(OPR)没有显著性差异(P>0.05)。
结论:
1.二十八烷醇可以明显增强小鼠的耐缺氧能力,减少大脑耗能,改善心肌缺氧,显著延长小鼠在常压密闭缺氧环境中的生存时间;
2.二十八烷醇不能改善机体血氧运输效率,但可以提高单个红细胞中血红蛋白的浓度,减小红细胞体积,有助于降低血液粘滞度,改善微循环;
3.二十八烷醇可以有效防治慢性缺氧引起的肺动脉高压,减轻慢性缺氧大鼠肺血管结构改建,抑制慢性缺氧大鼠右心室肥大,减轻心肌纤维化程度;
4.二十八烷醇可以显著增强慢性缺氧大鼠极量(有氧)运动能力,其机制可能与二十八烷醇提高慢性缺氧大鼠心肌线粒体氧化呼吸效率和ATP合成率,改善慢性缺氧大鼠心肌功能有关。
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