爱华网1．（15分）根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
[L] （１）限制性内切酶切割ＤＮＡ分子后产生的片段，其末端类型有 和 。[/L]
[L] （２）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：[/L]
[L]
[/L]
[L] 为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内[/L]
[L]切酶切割，该酶必须具有的特点是 。[/L]
[L]按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即 DNA连接酶和 DNA连接酶。[/L]
[L] （４）反转录作用的模板是 ，产物是 。若要在体外获得大量反转录产物，[/L]
[L]常采用 技术。[/L]
[L] （５）基因工程中除质粒外， 和 也可作为运载体。[/L]
[L] （６）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原[/L]
[L]因是 。[/L]
[L]2．（8分）请回答基因工程方面的有关问题：
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[L]（1）利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物中为单链[/L]
[L]DNA片段，它是子链合成延伸的基础。
①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA 片段所占比例为----------。[/L]
[L]②在第_______轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸等长的DNA片段。[/L]
[L]设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图），[/L]
[L]请分别说明理由。
[/L]
[L] ①第一组： ；②第二组______。[/L]
[L]PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能反映DNA聚合酶的功能，这是因为.[/L]
[L]
（4）用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个[/L]
[L]碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点。
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[L]（8分）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切[/L]
[L]位点。请回答下列问题：
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[L]（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有___个游离的磷酸基团。[/L]
[L]（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越______。[/L]
[L]（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是________。[/L]
[L]（4）与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在[/L]
[L]于可以防止________。[/L]
[L]（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶。 [/L]
[L]（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_________。[/L]
[L]（7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌[/L]
[L]突变体，然后在________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。[/L]
[L](7分)苏云金杆菌(Bt)能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。下图是转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程示[/L]
[L]意图(ampr为抗氨苄青霉素基因)，据图回答下列问题。[/L]
[L] [/L]
[L] (1)将图中①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有_______ 种DNA片段。[/L]
[L] (2)图中②表示 HindⅢ与BamHⅠ酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得______种重组质粒；如[/L]
[L]果换用Bst l与BamHⅠ酶切，目的基因与质粒连接后可获得_______种重组质粒。 [/L]
[L] (3)目的基因插人质粒后 ，不能影响质粒的_________。[/L]
[L] (4)图中③的Ti质粒调控合成的vir蛋白，可以协助带有目的基因的T—DNA导人植物细胞，并防止植[/L]
[L]物细胞中 ________对T—DNA的降解。[/L]
[L] (5)已知转基因植物中毒素蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂[/L]
[L]解，昆虫死亡。而该毒素蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞_____________。 [/L]
[L] (6)生产上常将上述转基因作物与非转基因作物混合播种，其目的是降低害虫种群中的_______基因频率[/L]
[L]的增长速率。[/L]
[L]（8分）将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。[/L]
[L]以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。[/L]
[L] [/L]
[L]请根据以上图表回答下列问题。[/L]
[L]（1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚[/L]
[L]合酶，其最主要的特点是__________。[/L]
[L]（2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两[/L]
[L]对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？__________。[/L]
[L]（3）图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？__________。[/L]
[L]（4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为 ___________。[/L]
[L]（5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中[/L]
[L]标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。[/L]
[L] ①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________种DNA片断。[/L]
[L] ②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________种DNA片断。[/L]
[L] [/L]
[L]【解析答案】[/L]
[L]1.【解析】本题着重考查基因工程方面的知识。限制性核酸内切酶可以将DNA分子切成两种类型的末[/L]
[L]端，平末端和黏性末端。两种不同酶切割之后便于相连，所产生的黏性末端必须相同。ＥcoliDNA连接[/L]
[L]酶可以连接黏性末端，Ｔ４DNA连接酶可以连接两种末端，反转录是以mRNA为模板逆转录先合成单[/L]
[L]链DNA，再合成双链DNA，利用ＰＣＲ技术进行大量扩增。基因工程中可以选用质粒，噬菌体、动植[/L]
[L]物病毒做载体。当受体细胞是细菌时，为了增大导入的成功率，常用Ca+处理，得到感受态细胞，此时[/L]
[L]细胞壁和细胞膜的通透性增大，容易吸收重组质粒。[/L]
[L]【答案】（１）平末端和粘性末端 （２）切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同 [/L]
[L]（３）Ｔ４ Ｅcoli （４）mRNA 单链ＤＮＡ ＰＣＲ（聚合酶链式反应） （５）动植[/L]
[L]物病毒 λ噬菌体的衍生物 （６）未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱[/L]
[L]2．（8分）[/L]
[L] （1）①15/16 ②三[/L]
[L] （2）①引物I和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效[/L]
[L] ②引物I’自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效[/L]
[L] （3）DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上[/L]
[L] （4）见右图
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[L]3.（８分）[/L]
[L]（1）0、2[/L]
[L]（2）高[/L]
[L]（3）SmaI会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因[/L]
[L]（4）质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化[/L]
[L]（5）DNA连接[/L]
[L]（6）鉴别和筛选含有目的基因的细胞[/L]
[L]（7）蔗糖为唯一含碳源营养物质[/L]
[L]4. [解析]：本题考查基因工程的相关知识。（1）由于上述两种酶形成的末端不一样，所以被两种不同的[/L]
[L]限制酶切割之后所形成的片段有AA、AB、BA、BB四种切法形成的四种片段。（A表示HindⅢ，B表[/L]
[L]示BamHⅠ）（2）同时被两种限制酶切割有两种不同的目的基因，即AB和BA，所以重组质粒有两种。[/L]
[L]Bst l与BamHⅠ酶切割的末端一样，所以同时用这两种限制酶切割只能形成一种目的基因，所以只能形[/L]
[L]成一种重组质粒。（3）质粒要进行复制才能更多的表达出产物，所以重组之后要能复制。（4）酶具有专[/L]
[L]一性，对T—DNA的降解酶为DNA水解酶。（5）生物的细胞表面的受体具有特异性，人类肠上皮细胞[/L]
[L]没有昆虫肠上皮细胞表面的特异受体。所以该毒素蛋白对人类的风险相对较小（6）自然选择是普遍存[/L]
[L]在的，纯种种植自然选择会使害虫抗性基因频率快速增长。所以混合种植降低害虫的抗性基因频率的增[/L]
[L]长速率。[/L]
[L] 答案：(1)4 (2)2 1 (3)复制 (4)DNA水解酶
(5)表面无相应的特异性受体(6)抗性
[L]5.（1）耐高温 2）引物对B （3）否 （4）农杆菌 （5）①2 ②1
