爱华网第34卷第5期2011年
JournalofLuzhouMedicalCollegeVol.34No.52011泸州医学院学报
539
论著
人参皂甙Rb1对马桑内酯癫痫的作用
及海马蛋白组表达的影响*
赵春玲，张春来，徐倩，杨烨1，张春燕1
（泸州医学院：生理教研室；1生物化学教研室,四川泸州
摘
646000）
要目的：观察人参皂甙Rb1（GRb1）对马桑内酯（CL）所致大鼠癫痫及海马神经元损伤的作用，运用双向电泳（2-DE）
技术获得可能与CL癫痫发作及GRb1神经保护作用有关的蛋白质成分，探讨海马组织蛋白质在癫痫发生发展过程中的作用和地位及GRb1对其的影响。方法：雄性成年SD大鼠随机均分为对照组、CL组和GRb1+CL组(n=10)。GRb1+CL组在实验前3d，大鼠每日灌胃GRb1（1.5mg/ml,30mg/kg），另2组灌胃等量生理盐水；实验日CL组和GRb1+CL组腹腔注射CL(1mg/ml,4mg/
kg)，对照组腹腔注射等量生理盐水。观察各组大鼠的行为学变化3h。各组半数动物麻醉后灌注固定，HE染色观察海马组织学改
变。半数动物，断头处死剥离海马组织并提取蛋白，双向电泳(2-DE)分离，ImageMaster2DPlatinumv5.0软件差异表达蛋白质组分析，基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定蛋白质。结果：①癫痫发作的行为表现：对照组大鼠未见痫性发作；CL组痫性发作程度较高（Ⅲ~Ⅴ级）；与CL组相比，GRb1+CL组大鼠的痫性发作程度明显减低，潜伏期变长，持续时间变短(P<0.01)。②海马组织学（HE染色）改变：对照组大鼠海马组织结构正常；CL组大鼠可见海马神经元变性坏死，尤以
CA3区和齿状回最明显；GRb1+CL组大鼠海马神经元结构无明显改变。③获得大鼠海马组织蛋白质组双向电泳图谱；差异表
达蛋白质组分析显示GRb1+CL组与对照组差异蛋白斑点84个，GRb1+CL组与CL组差异蛋白斑点120个。④鉴定出6个蛋白质分别是：脑肌酸激酶（braincreatinekinase）、吞蛋白A1（endophilin-A1）、UPF0628蛋白C10orf96同源物（UPF0628protein
C10orf96homolog）、细胞色素P-450（cytochromeP-450）、磷导素样蛋白（phosducin-likeprotein）及桥整合蛋白3（bridginginte-grator3）。其中前3个蛋白质在GRb1+CL组表达低于CL组，后3个蛋白质在GRb1+CL组表达低于对照组。结论：GRb1可
减轻CL所致大鼠癫痫的发作程度及海马神经元损伤。CL组、GRb1+CL组和对照组的表达蛋白质组相比存在明显差异。鉴定出的差异表达的蛋白质braincreatinekinase、endophilin-A1、UPF0628proteinC10orf96homolog可能与CL所致癫痫发作有关；
cytochromeP-450、phosducin-likeprotein及bridgingintegrator3可能与GRb1的神经保护作用有关。
关键词马桑内酯；癫痫；人参皂甙Rb1；双向电泳；蛋白质组中图分类号R338;Q593
文献标识码A
文章编号1000-2669（2011）5-0539-07
EFFECTSOFGINSENOSIDERb1ONRATEPILEPSYINDUCEDBY
CORIARIALACTONEANDPROTEOMECHANGES
INHIPPOCAMPUS
ZhaoChunling,etal
DepartmentofPhysiology,LuzhouMedicalCollege
AbstractObjective:ToobservetheeffectsofginsenosideRb1(GRb1)onratepilepsyseizuresandthechan-gesofproteinexpressioninhippocampusinducedbyCoriariaLactone(CL),andtoexplorethemolecularmechani-smindevelopmentofCLinducedepilepsy.Methods:ThirtyadultmaleSDratswererandomlydividedinto3groups:controlgroup,CLepilepticgroupandGRb1+CLgroup.TheGRb1+CLgroupwasadministeredorallywithGRb1(1.5mg/ml,30mg/kg)onceadayfor3days.TheotherswereadministeredorallywithsamevolumeofNS.Onthefourthday,theratsinCLandGRb1+CLgroupwereadministeredbyintraperitonealinjectionwithCL
*四川省教育厅资助项目（2006C010）
：，，
540
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(1mg/ml,4mg/kg),whiletheotherswereadministeredbyintraperitonealinjectionwithsamevolumeofNS.Thebehaviorchangeswereobservedfor3hours.Onehalfratsofeachgroupwereanesthetizedwith2%pentobarbitalsodium,thenfixedbyinfusionwith4%paraformaldehyde.Ratbrainwastakenandputinto4%paraformaldehydeforonenight.Thenthemicrostructureofhippocampalneuronsofratswasobservedwithhematoxylin-eosinstain-ing.Theotherhalfweredecapitatedandtheirhippocampuswerestripped.Two-dimensionalelectrophoresiswasappliedtoseparatetheproteinsofhippocampustissuefromeachgroup.Analysisof2-DEmapswasusedtode-terminedifferentialexpressionofproteinsbyImageMaster2DPlatinumv5.0,andsomeproteinspotsexpresseddifferentlywerepickedupforfurtheridentificationbymatrix-assistedlasersorptionionizationtimeofflightmassspectrometry(MALDI-TOF-MS).Results:①Behaviorchangesofepileptogenicrats:controlratshadnoseizures;CLepilepticratsshowedⅢ~Ⅴattack;inGRb1+CLgroup,thedegreeofepilepticseizuresandlatencyanddu-rationweresignificantlylowerandlessthanthoseofCLepilepticrats(P<0.01).②Morphologicchangesinhip-pocampus:thestructureofneuronsinhippocampusincontrolgroupwasnormal.Degenerationornecrosisofneu-ronswasobservedinCLepilepticgrouprats,particularlyinCA3regionanddentategyrus.InGRb1+CLgroup,neuronstructureinhippocampushadnosignificantchangecomparedwithcontrolrats.③Rathippocampuspro-teomemapoftwo-dimensionalgelelectrophoresissuccessfullyestablishedwithgoodrepeatability.EightyfourproteinspotsweredifferentlyexpressedbymatchingcontrolgroupgeltoGRb1+CLgroupgel.OnehundredandtwentyproteinspotsweredifferentlyexpressedbymatchingCLgroupgeltoGRb1+CLgroupgel.④Sixproteinsweresuccessfullyindetified.Amongthese,theexpressionofBraincreatinekinase,Endophilin-A1andUPF0628proteinC10orf96homologinGRb1+CLepilepticgroupwerelowerthanthoseinCLepilepticgroup;andtheex-pressionofCytochromeP-450,Phosducin-likeproteinandBridgingintegrator3inGRb1+CLepilepticgroupwerelowerthanthoseincontrolgroup.Conclusions:①GRb1canlightentheCL-inducedseizuresandneuroninjuryofhippocampusinrats.②ThereisanobviousdifferenceofProteomeexpressioninhippocampusamongcontrolgroup,CLepilepticgroupandGRb1+CLepilepticgroup.③Theidentified6proteinsmayberelatedtoneuroprotectiveeffectsofGRb1.Amongthese,Braincreatinekinase,Endophilin-A1,UPF0628proteinC10orf96homologmayberelatedtoCL-inducedseizures;CytochromeP-450,Phosducin-likeproteinandBridgingintegra-tor3mayberelatedtotheneuro-protectiveeffectsofGRb1.
KeywordsCoriariaLactone;Epilepsy;GinsenosideRb1;Two-phaseelectrophoresis;Proteome
癫痫（epilepsy）是多基因介导的遗传易感性和后天性诸多因素等共同促成的一类复杂的慢性脑部疾病。海马既是癫痫好发部位，也是癫痫研究最多的部位。既往研究显示，癫痫发作后引起包括脑神经元凋亡在内的神经元死亡，人和动物癫痫病灶中存在神经元的数目减少现象以海马神经元多见[1~4]。
马桑内酯（coriarialactone,CL）是从抗精神病中草药马桑寄生中提取的有效成分，具有强烈的致痫作用。CL致痫具有造模简单易行，痫性发作稳定的特点。至1980年以来，柴慧霞、陈启贤、郭亮等已成功运用CL在多种动物身上建立了整体的急慢性癫痫模型和大鼠海马脑片锥体细胞癫痫样放电的模型，因此采用CL建立癫痫模型是研究癫痫的重要手段之一[5，6]。
大量的临床和实验研究已经证实了单味中药的痫患者认知功能的损害越来越引起人们的关注，中药治疗癫痫以其低毒副作用越来越显示出其优越性，但其成分的复杂性制约着中药作用机制的研究，因此对中药单体的研究，是目前中药研究的发展趋势之一。人参皂甙Rb1（ginsenosideRb1,GRb1）系从人参中提取的单体，具有抗氧化、抑制一氧化氮合酶活性、减少一氧化氮的过量产生、阻止细胞外Ca2+内流减轻钙超载等作用[7]。GRb1可通过上述多种机制以及抑制神经细胞凋亡和促进细胞增殖等对缺血性脑损伤起到营养、保护和促进受损神经元修复的作用[8~11]。GRb1对海马神经元作用的研究提示，GRb1可拮抗海马神经细胞凋亡、减轻大鼠海马神经元的
Tau蛋白过度磷酸化以及明显延长原代培养的大鼠
海马神经细胞的存活时间、降低神经细胞的死亡率，并对抗谷氨酸介导的神经毒性等[12~15]。但GRb1对癫。
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本研究观察GRb1对CL致痫大鼠的行为学及海马组织学改变的影响，并采用“蛋白质组学”的研究方法，通过双向凝胶电泳（two-dimensionalelec-
水外，余处理同CL组。
1.2.2大鼠行为学观察
各组大鼠腹腔注射CL或生理盐水后，观察动物行为学改变3h。按模型制备所述标准记录每只动物的癫痫发作潜伏期、程度等级和持续时间。
trophoresis，2-DE）、质谱分析和生物信息学等技术方
法，获得大鼠海马组织蛋白质图谱。通过对这些图谱进行分析并结合Internet数据库资料，以寻找CL癫痫损伤及GRb1神经保护作用有关的蛋白成分，全面了解这些蛋白表达谱，为获得对癫痫发病机制深刻的理解并发掘出早期诊断的标志物以及有价值的治疗性靶分子奠定基础。
1.2.3海马组织病理改变
各组大鼠行为学观察结束后，半数动物用2%戊巴比妥钠麻醉后，开胸暴露心脏，经左心室及主动脉用150～200ml的生理盐水快速灌注冲洗，继以
400ml4％多聚甲醛灌注固定，随后断头取脑组织。
将大鼠脑组织置于4%多聚甲醛中固定过夜，常规脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋好后将脑组织切成厚度为
1材料和方法1.1材料1.1.1动物
健康Stragu-Dawley(SD)雄性大鼠20只，体重
4μm的切片，经HE染色后分别在100倍和400倍
视野光学显微镜下观察海马神经元的组织学改变。
1.2.4海马组织蛋白组学差异分析及差异蛋白鉴定
各组另半数大鼠断头处死取脑组织并剥离海马，取海马组织60mg+300ml裂解液冰上裂解
240～260g，由泸州医学院动物科提供（获得四川省标
准动物管理质量控制认证）。动物饲养及实验操作均按照国家科技部制定的中国实验动物处理和使用的指导建议进行。各组大鼠均自由饮水与摄食，生活环境及饲养条件相同。
30min，4℃，12000rpm离心1h，收集的上清液即为蛋
白质提取物。用Bradford法测定各样品的总蛋白含量，分装，-80℃保存备用。采用17cm的线性IPG预制干胶条(pH4~7)，每根胶条上样量260μg，按照
1.1.2主要试剂和器材
马桑内酯，华西医科大学制药厂；人参皂甙Rb1，成都蓉金医药科技开发有限公司；蛋白定量和双向电泳试剂，Bio-Rad公司。组织匀浆器，北京鼎国公司；Labofuge400R冷冻离心机，Heraeus公司；PRO-
Bio-Rad公司说明书进行第一向固相pH梯度等电
聚焦，总伏时数约为80000。随后按常规方法进行第二向SDS－PAGE。采用银染法对双向电泳后的凝胶进行染色。采用ImageMaster2DPlatinumv5.0分析软件进行蛋白质的差异分析，以GRb1+CL组凝胶作为参考胶分别与对照组和CL组凝胶进行蛋白斑点匹配，在CL组和GRb1+CL组分别选取相对表达量差异达5倍以上的蛋白斑点各3个，胶内酶切，进行
TEANIEFCELLIEF电泳仪，Bio-Rad；PROTEANⅡMulti-Cell垂直电泳系统，Bio-Rad；凝胶图像扫
描仪PowerLook1100，UMAX；4700串联飞行时间质谱仪，美国ABI。
1.2方法
1.2.1模型制备及分组
参照柴慧霞等[6]制作的大鼠癫痫模型，并参照
MALDI-TOF-MS鉴定，获得各蛋白斑点的肽指纹
图谱。再结合这些蛋白斑点的pI和MW等信息，使用肽指纹图谱匹配软件Mascot检索匹配GenBank数据库进行蛋白斑点的鉴定。
Diehl[16]的癫痫分级标准对癫痫发作进行分级：0级：
无异常行为；Ⅰ级：须动,咀嚼，跑动；Ⅱ级：头面部抽搐；Ⅲ级：上肢或下肢间断性抽搐；Ⅳ级：四肢和躯干持续节律性抽搐；Ⅴ级：四肢和躯干强直性抽搐或伴有翻滚、跌倒等表现。Ⅲ级及Ⅲ级以下为轻型发作，
1.2.5主要观察指标
大鼠行为学观察（癫痫发作程度等级，潜伏期及持续时间）；海马组织病理学改变（HE染色法）；海马蛋白组表达变化（蛋白质图谱，差异蛋白分析及鉴定）。
Ⅳ级及以上为重型发作。选取雄性成年SD大鼠30
只，随机均分为3组：对照组、CL组和GRb1+CL组。
1.2.6统计学分析
GRb1+CL组大鼠用GRb1（30mg/kg）每天灌胃1次,
连续3d，第4d腹腔注射CL（4mg/kg），观察其行为学改变。自腹腔注射CL后开始计时，3h时取材。CL组除实验前3d用等量生理盐水灌胃外，余处理同
用SPSS13.0统计软件进行统计学分析。计量实验数据采用±s表示。单变量配对资料之间的比较采用配对样本t检验。计数资料采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
5422结
果
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表2各组大鼠癫痫发作潜伏期及持续时间比较(±s)
分组
潜伏期(min)
持续时间(min)
2.1大鼠行为学改变
对照组大鼠未见痫性发作。CL组痫性发作程度较高，在注射CL后15～20min左右即出现Ⅲ~Ⅳ级发作，持续5～10min，间隔3～5min再次发作，但程度较前次轻，之后发作间隔时间延长，程度逐渐减轻。与CL组相比，Rb1+CL组大鼠的痫性发作程度明显减低，潜伏期变长，持续时间变短(P<0.01)，差异有统计学意义（见表1，2）。
表1各组大鼠癫痫发作强度比较(±s)分组对照组
癫痫发作强度
对照组
016.29±0.37a34.35±0.42b
07.51±0.48a2.45±0.39b
CL组GRb1+CL组
注：a与对照组比较P<0.01；b与CL组比较P<0.01
2.2大鼠海马组织结构改变
对照组大鼠海马神经细胞排列整齐，边缘清晰，细胞核呈圆形或椭圆形，居中，核仁清晰，胞浆淡染，其中CA1区和CA3区的大量锥体细胞排列紧密、规则，细胞体突起明显，核大而圆，核仁明显(见图1A)。
CL组大鼠海马神经元受到损害，尤以CA3区和齿状
Ⅳ030
Ⅴ060
01008
a
Ⅰ001
Ⅱ001
Ⅲ010
回最明显，正常细胞明显减少，表现为神经元细胞肿胀，排列不整齐、稀疏，细胞间隙增大，细胞体突起明显减少，细胞轮廓不清，胞核异位核仁模糊，坏死的神经元胞浆浓缩、深染，核碎裂，星形胶质细胞体积增大，胞浆淡染(见图1B)。GRb1+CL组大鼠海马神经元CA1到CA4区及齿状回细胞排列紧密、规则，细胞体突起明显，核大而圆，核仁明显（见图1C）。
CL组
GRb1+CL组b
注：a与对照组比较P<0.01；b与CL组比较P<0.01
A
A：对照组
B：CL组
B
C：GRb1+CL组
C
图1各组大鼠海马CA3区病理组织学改变（HE×400）
2.3蛋白质图谱改变
GRb1＋CL组与CL组和对照组相比，蛋白质图
谱发生了明显改变，主要表现为蛋白质斑点数量的增减和灰度值的变化。GRb1+CL组与对照组的差异
蛋白斑点有84个，GRb1+CL组与CL组的差异蛋白斑点有120个，这些表达差异的蛋白质斑点绝大部分集中于pH4.2～6.7的偏酸性区域，相对分子质量主要介于16000～96000（见图2，3）。
A
4
pIA：对照组
7
4
pIB：CL组
B7
4
pIC：GRb1+CL组
C7
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MW（kDa）
94.066.2
4
5
6
45.035.026.0
MW（kDa）
94.0
123
66.245.035.026.0A
4
pIA:CL组
7
4
pIB:GRb1+CL组
4：细胞色素P450，5：磷导素样蛋白，6：桥整合蛋白3
图3
进行质谱鉴定的蛋白点选取
B7
1~6示选取蛋白质鉴定点，结果为1：脑肌酸激酶，2：吞蛋白A1，3：UPF0628蛋白C10orf96同源物，
2.4蛋白质鉴定
筛选出的6个差异表达的蛋白质斑点进行
细胞色素P450、磷导素样蛋白和桥整合蛋白3（见图
3，表3）。其中前3个蛋白质在GRb1+CL组表达低
于CL组，后3个蛋白质在GRb1+CL组表达低于对照组。
MALDI-TOF-MS检测，获得了各蛋白质斑点的肽指
纹图谱。鉴定出的这6个差异表达的蛋白质为：脑肌酸激酶、吞蛋白A1、UPF0628蛋白C10orf96同源物、
表3
序号GenBank注册号
蛋白名称
质谱分析鉴定的蛋白质
GroupID匹配Score理论MW理论pI实验MW
536472338856
664356
429704004531075562123427429691
5.335.265.266.794.756.95
522274536234434523422837626840
实验pI
123456
31542401119588806250910972145070510177577531055
braincreatinekinase（脑肌酸激酶）endophilin-A1（吞蛋白A1）UPF0628proteinC10orf96homolog
（UPF0628蛋白C10orf96同源物）
5.615.205.326.824.776.80
cytochromeP450（细胞色素P450）phosdusin-likeprotein（磷导素样蛋白）bridgingintegrator3（桥整合蛋白3）
3讨论
痫发作并造成海马神经元损伤，GRb1可减轻CL癫痫发作并对其海马神经元损伤有保护作用。
本研究从海马组织蛋白组表达角度探讨GRb1对CL癫痫的作用机制。已鉴定出6个差异表达的蛋白斑点，其中脑肌酸激酶、吞蛋白A1和UPF0628蛋白C10orf96同源物在CL组表达高于GRb1+CL组。推测它们可能与CL所致的癫痫发作和海马神经元损伤有关，也可能与GRb1减轻癫痫发作和神经元损伤有关。鉴定出的6个蛋白质在前述学者对癫痫病人及匹洛卡品颞叶癫痫动物模型蛋白组学分析中未见相同蛋白质报道。
脑肌酸激酶，是在脑内催化ATP和肌酸转化为
蛋白质组学技术是一种研究特定细胞、组织或完整生物体所表达的全部蛋白质及其活动规律的学科。这种技术的出现为在蛋白质整体水平上探讨疾病的发生发展机制提供了可能。蛋白组学技术在癫痫机制的研究已逐渐受到国内外学者的重视，对癫痫病人大脑皮质及匹洛卡品所致颞叶癫痫动物模型海马蛋白质组学分析研究发现数个差异表达蛋白，其在神经损伤、突触传递、能量代谢和氧化应激等多方面起着重要作用[17~19]。
本研究中大鼠行为学和海马组织病理学改变结果显示，CL组癫痫发作平均达到Ⅳ级发作，海马内神经元变性、坏死；而GRb1+CL组仅个别大鼠有Ⅰ~Ⅱ，ADP和磷酸肌酸的特殊同工酶，可能在小脑的发育
过程中参与ATP的产生过程。脑肌酸激酶活性高低，，
544
破坏范围越大，脑肌酸激酶活性越高[20]。本实验中
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形式存在。正常细胞中肌动蛋白两种形态的转换处于动态平衡，共同行使细胞的变形运动、胞质分裂、基质附着和胞间连接等多项功能[26]。它们在细胞的形态维持、物质运输、信号转导、能量转换及细胞的运动和分裂等多个过程中发挥着重要的作用[27]。
本研究中已鉴定的相关的蛋白质涉及细胞凋亡、细胞信号转导、物质转运等，提示癫痫发生和发展过程可能涉及相应的病理生理过程。今后将结合细胞信号转导途径，从细胞整体生理活动变化的角度分析上述已鉴定的差异表达的蛋白质在癫痫发生和发展过程中的生物学意义，以期获得对癫痫发病机制更深刻的理解，发掘出早期诊断的标志物以及有价值的治疗性靶分子等。
参考文献
1.
FujikawaDG,ItabashiHH,WuA,etal.Statusepilepti-cus-inducedneuronallossinhumanswithoutsystemiccomplicationsorepilepsy[J].Epilepsia,2000;41(8)：9812.
MikaeloffY,JambaqueI,Hertz-PannierL,etal.Devastat-ingepilepticencephalopathyinschool-agedchildren(DESC):apseudoencephalitis[J].EpilepsyRes,2006;69(1):673.
PitkanenA,KharatishviliI,KarhunenH,etal.Epileptoge-nesisinexperimentalmodels[J].Epilepsia,2007;48(Suppl2):134.
JimenezMateosEM,HatazakiS,JohnsonMB,etal.Hip-pocampaltranscriptomeafterstatusepilepticusinmicerenderedseizuredamage-tolerantbyepilepticprecondi-tioningfeaturessuppressedcalciumandneuronalexcitabil-itypathways[J].NeurobiolDis,2008;32(3):4425.
LiuGY,WangQZ,GuoY,etal.TheexpressionofHSP70inarcuatenucleusofacuteepilepticrat-immuno-histochemicalstudy[J].JournalofLuzhouMedicalCollege,2003;26(3):1936.7.
柴慧霞,谢扬高,陈启贤,等.马桑内酯制造大鼠癫痫模型的报告[J].四川医学院学报,1983;14(3):283王卫霞,王
巍,陈可冀.人参皂甙对动物脑神经保护作
用及其机理研究进展[J].中国中西医结合杂志,2005;25
CL组脑肌酸激酶表达上调说明可能与CL诱导大鼠
癫痫发生后引起的脑损伤有关。同时脑肌酸激酶在
GRb1+CL组表达下调说明可能是由于GRb1抑制其
活性而产生的神经保护作用。吞蛋白A1是一种脂质酵素，属于吞蛋白家族，含有一个BAR结构域和一个SH3结构域，其功能和磷脂酶A2反向，与突触囊泡的内吞作用相关，负责在细胞内外转运物质[21]。
UPF0628蛋白C10orf96同源物属于UPF0628蛋白
质家族，其功能尚未阐明。
细胞色素P450、磷导素样蛋白和桥整合蛋白3在GRb1+CL组表达低于对照组，推测可能是GRb1通过抑制这3种蛋白质的表达而发挥神经保护作用。细胞色素P450是广泛存在于生物体内的一类含血红素和硫羟基的蛋白。细胞色素P450同工酶是血红蛋白超级家族，参与外源性物质的代谢，所产生的代谢产物可能有毒性或致癌性。P450代谢活性产物造成细胞损伤有2条途径[22]:①药物活性代谢产物直接与细胞内大分子如DNA、蛋白质共价结合,破坏细胞内稳态,导致细胞凋亡（坏死）；②通过与氧分子作用产生活性氧产物,从而引起细胞突变,脂质过氧化破坏细胞结构和蛋白,大量Ca内流激活
2+
Ca2+依赖蛋白酶和核酸酶,最终导致细胞死亡。俄罗
斯医学科学院Myasoedova认为[23]，在一定条件下细胞色素P450能够产生活性氧，最近在线粒体中也发现微粒体细胞色素P450的类似物，推测它能导致线粒体功能紊乱、细胞凋亡，还可能参与了一些疾病的发生。细胞色素P450在GRb1+CL组表达下调，说明GRb1可能通过抑制细胞色素P450的表达而起到抗细胞凋亡的作用。磷导素样蛋白，通常以βγ复合物的形式存在，是一种GTP结合蛋白，为信号转导蛋白。有研究认为，磷导素样蛋白作为分子伴侣参与G蛋白βγ二聚体的装配过程,其缺失可抑制
[24]
G蛋白βγ二聚体的形成，影响G蛋白信号转导系
统的信号传递过程。信号转导在难治性癫痫的发病机制中起着重要作用[25]，胞外信号脑源性神经生长因子、神经递质通过跨膜结构酪氨酸受体激酶、G蛋白耦联受体;神经细胞粘附分子介导的细胞直接接触都可激活胞内蛋白激酶,如丝裂素活化蛋白激酶、蛋白激酶C,通过调节神经元生长、分化、凋亡和诱导神经元重组等方式参与难治性癫痫的发病。桥整合蛋白3，包含一个BAR结构域，与胞质分裂和分隔有关，在纤丝状肌动蛋白的定位中有一定作用，以10.9.8.
(1):89
李爱红,柯开富,包仕尧,等.人参皂甙Rb1、Rb3、Rg1对培养小鼠皮层细胞缺血损伤的保护作用及浓度效应关系[J].脑与神经疾病杂志,2003;11(2):72
LeeJK,ChoiSS,LeeHK.etal.EffectsofginsenosideRdanddecursinolontheneurotoxicresponsesinducedbykainicacidinmice[J].PlantaMed,2003;69(3):230BaeEA,HyunYJ,ChooMK,etal.Protectiveeffectof
第5期赵春玲等：人参皂甙Rb1对马桑内酯癫痫的作用及海马蛋白组表达的影响
545
[J].ArchPharmRes,2004;27(11):113611.
ShenL,ZhangJ.GinsenosideRg1increasesischemia-in-ducedcellproliferationandsurvivalinthedentategyrusofadultgerbils[J].NeurosciLett,2003;44(1):112.
朱陵群,范吉平,黄启福,等.人参皂苷Rb1对大鼠胎鼠海马神经细胞凋亡的影响[J].中国病理生理杂志,2001;17
teomics,2008;8(3):58220.
吴
英.脑损伤患者血清肌酸激酶及乳酸脱氢酶同工酶的分析与临床应用[J].西南师范大学学报:自然科学版,
2008;33(3):11321.
NakanoKobayashiA,KasriNN,NeweySE,etal.TheRho-linkedmentalretardationproteinOPHN1controlssynapticvesicleendocytosisviaendophilinA1[J].CurrBi-ol,2009;19(13):113322.23.24.
黄
翀，张欣欣.细胞色素P450在药物性肝损伤中的作用[J].肝脏,2008;13(3):252
(12):122913.
李永坤,陈晓春,朱元贵,等.人参皂甙Rb1减轻冈田酸诱导的大鼠海马神经元Tau蛋白过度磷酸化[J].生理学报,
2005;57(2):15414.
谢玉华,陈晓春,张
静,等.人参皂苷Rb1可能通过CDK5
途径减轻Aβ25-35诱导的胎鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化[J].药学学报,2007;42(8):828
MyasoedovaKN.NewfindingsinstudiesofcytochromesP450[J].Biochemistry,2008;73(9):965
GeorgiLLukov,TingHu,JosephNMcLaughlin,etal.Phosducin-likeproteinactsasamolecularchaperoneforGproteinβγdimerassembly[J].EMBOJ,2005;24(11):1965
15.16.
刘忞,张均田.人参皂甙Rb1和Rg1对原代培养大
鼠海马神经细胞的保护作用[J].药学学报,1995;30(9):674
DiehlGR,SmialowskiA,GotwoT.Developmentandpersistenceofkindlelseizuresafterrepeatediniectionofpentylenetetrazolinratsandguineapigs[J].Epilepsia,1984;259(4):506
25.26.
夏杰,陈阳美.难治性癫痫与信号转导[J].国外医学:神
经病学.神经外科学分册,2004;31(1):64
BausenM,FuhnnannJC,BetzH,etal.Thestateoftheactincytoskeletondeterminesitsassociationwithgephyrin:roleofena/VASPfamilymembers[J].MolCellNeurosci,2006;31(2):376
17.18.
荣佳,崔亚洲,周小艳,等.颞叶癫痫大鼠模型海马蛋白
质组学的研究[J].山东大学学报（医学版),2011;49(2):39
EunJP,ChoiHY,KwakYG.Proteomicanalysisofhu-mancerebralcortexinepilepticPatients[J].ExpMolMed,2004;36(2):185
27.邢鸣鸾,朱欣,王晓峰,等.荧光标记法检测不同毒物对
细胞骨架的影响[J].水生生物学报,2007;30(6):912
19.LiuXY,YangJL,ChenLJ,etal.Comparativeproteomicsandcorrelatedsignalingnetworkofrathippocampusinthepilocarpinemodeloftemporallobeepilepsy[J].Pro-（2011-06-28收稿）
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王钦博士入选2010年度教育部新世纪优秀人才支持计划
近日获悉，我校药学院王钦博士被列为2010年度教育部“新世纪优秀人才支持计划”，获得资助经费50万元。此次我省共有6人入选该支持计划。目前，我校共有2名科技人员获得该类计划资助。
国家教育部“新世纪优秀人才支持计划”旨在对具有较高学术水平、突出的创新能力和发展潜力的优秀青年学术带头人给予资助，支持其开展创新性研究工作，承担国家重大科研任务，为培养他们成为优秀学科带头人搭建台阶、创造条件。每年遴选支持1000名左右自然科学和人文社会科学领域的优秀青年学术带头人，资助期限为3年。资助经费总额为自然科学类每人50万元，人文社会科学类每人20万元。
另外王钦博士申报的2010年度教育部重点项目“手性炔丙醇的生物酶催化合成研究”也获得立项资助，资助经费5万元。
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