爱华网可用于流感疫苗生产的细胞筛选及其悬浮培养技术研究
第一部分 工作总结
一、任务来源
“可用于流感疫苗生产的细胞筛选及其悬浮培养技术研究”项目于2009年由武汉市科技局下达，其批准文号为：武科计[2009]173号文，项目编号为：200951830555.
二、立体依据与目的意义
由流感病毒引起的流行性感冒病是最为常发的疾病之一，由流感病毒的各种变异株引发的烈性传染病也是最为频发、造成的社会恐慌与损失最大的疫病种类。近年来，由流感病毒及其变异毒株引发的烈性传染病如高致病性禽流感、甲型H1N1型流感疫病，给人类生命安全带来了严重威胁，也给畜禽养殖业、乃至整个社会的各个方面带来了无法估量的损失
【1】
。同其他病毒性疫病一样，到现在为止，人类防控流
感疫病尚无特效药物，只能靠疫苗预防。
我国每年常规流感病疫苗产销量约为1500-2000万支（人份），进口同类产品约780万支【6】；高致病性禽流感疫苗的产销量约为120亿羽份，即将推出的人用甲型H1N1型流感疫苗计划为1.5亿支（人份），这些疫苗的市场总值约为200亿元人民币。从产业角度来说这是一个巨大的市场；从政府职能角度来说，这些疫苗是国家用以控制疫情、减少损失、稳定社会的主要工具。国产疫苗质量的好坏、生产技术
的先进程度是事关国内企业能否占领庞大的流感疫苗市场、国家能否掌控应对重大流感疫情突发事件主动权的重大问题。
目前，流感疫苗的生产主要靠鸡胚培养技术，还没有一个用细胞培养技术生产的流感疫苗产品应用于临床。与细胞培养技术相比较，鸡胚培养技术生产疫苗存在着很大的缺陷：操作繁琐、耗时较长，无法应对突发的新型变异型流感疫情；劳动强度大；具有散毒危险的副产品比例大、处理成本高昂、对环境的潜在威胁大
【2】
。流感疫苗的生产长期未能
使用细胞培养技术，最主要的原因是人们尚未找到合适的宿发达国家如美国等最近在该方面取得了突破性进主细胞【3】。
展，他们的流感病毒细胞苗即将投放市场【4】。如果我国现在不抓紧该方面的研究工作，今后，我国相关的疫苗产品将处于竞争劣势地位，这对我国相关产业以及流感类疫病的防控将会产生严重的负面影响。
武汉市畜牧兽医科学研究所与武汉中博生化公司等单位一道，在承担武汉市科技局下达的“高致病性禽流感监测预警、抗体库建立及综合防治技术研究”的项目工作中，发现胎羊肾细胞能够培养出高效价流感病毒，这一发现将可能解决高效价流感病毒培养的宿主细胞瓶颈难题。本项目在此基础上，进一步将胎羊肾细胞中对流感病毒高度易感的细胞群进行筛选纯化，并将其建成细胞系，建设种子细胞库，同
时研究其工厂化培养工艺，使其最终成为各种流感疫苗生产的宿主细胞源，为我国自主开发优质的流感病毒细胞苗提供细胞源与技术基础。
研究目标
（1）筛选并分离纯化对流感病毒高度易感的细胞，该细胞在单层生长情况下，培养流感病毒的凝血效价达到28以上、在生物反应罐高密度生长情况下，培养流感病毒的凝血效价达到211以上。
（2）建成该细胞的无污染种子细胞库，该细胞库细胞能长期传代，其稳定传代到50代以上不出现生命力衰减。可随时为国内相关科研与产品研发单位无限量提供该种子细胞。
（3）获得该细胞生物反应罐培养条件下大批量扩繁及大批量培养流感病毒的配套技术，使其培养流感病毒的凝血效价达到210-212。
（4）用该细胞生产1-2个低致病性畜、禽流感疫苗的技术体系进入新兽药证书申报程序。
三、所开展的工作
1、开展了从胎羊肾组织分离纯化对流感病毒高度易感的目标细胞技术研究，获得了分离纯化技术以及纯化的目标细胞—胎羊肾细胞，为整个项目的顺利实施准备了研究材料。
2、开展了胎羊肾细胞细胞永续培养、建立细胞系的技术研究，获得了胎羊肾细胞永续培养的技术以及永生性胎羊肾细胞系。
3、开展了胎羊肾细胞系培养高效价流感病毒的工艺研究，获得了用胎羊肾细胞培养H9N3流感病毒的培养工艺。
4、开展了用胎羊肾细胞系培养的H9N2病毒配置的疫苗的免疫效果试验，获得了理想的免疫效果，验证了胎羊肾细胞系在流感疫苗生产中的可用性。
四、已获得的知识产权
1、获得国家发明专利授权2项：。专利号为：ZL200810047297.1，该专利技术目前已转让至多家企业，为这些企业带来了较好的经济效益，同时也为这些企业开发流感疫苗产品等提供了技术基础。。专利号为：ZL201110298932.5，该专利技术及其产生的细胞系作为本项目研究的一部分，保证培养过程始终处于无支原体污染状态，目前已作为一种抗培养过程的支原体污染手段应用于多种疫苗生产过程中。
2、获得可培养高效价流感病毒的胎羊肾细胞系。 3、发表论文一篇：《胎羊肾细胞用于增殖流感病毒的初步研究》 动物医学进展，2013年第二期，p52-55
五、该成果对行业的未来发展可能产生的影响 1、本项目研究所获得的胎羊肾细胞系是一个较为纯净、无生物安全隐患，对流感病毒更加易感的新型细胞系，其用于流感病毒的科研与产品研发工作将会获得更多有益于该领域科技发展与产品开发的新成果。
2、当武汉中博生物股份有限公司申报新兽药证书取得成功将不仅使该企业获得一个新的产品，也将可能改进整个流感疫苗生产行业的技术体系，彻底克服现行技术的缺陷，迎头赶上世界先进水平。
六、项目资金使用情况（见表1）
年度 政府资助
2010年 10万元
2011年
2012年
总计 10万元
科研业
3814元 8115.9元 6318元 18247.9务费 实验材
8844元 13734元 6473.5元 29052.5料费 仪器设
18800元 18800元 支出备费
劳务费
其他 总计
4017元 5000元
12807元 5000元
4471元
21295元 10000元 97395.4
整个项目计划总经费10万元，截止2012年12月，已使用项目经费97395.4元，结余2604.6元，尚有项目鉴定材料打印费等未予结清，基本按计划使用。
七、项目参与人员情况（见表2）
序号 1 2 3 4 5 5 6 7 8 9 10 11
姓 性名 别 高其双 向敏 陈志华 尹建文 卢顺 黄海军 钱运国 彭霞 周莉 陶弼菲 占才耀 龚余亮
出生年
月
技术职称 正高级畜牧师
文化程度 （学位）本科 硕士 本科 本科 博士 博士 硕士 博士 硕士 本科 本科
工 作 单 对成果创
位 造性贡献 武汉畜牧兽医科学研究所 武汉畜牧兽医科学研究所 武汉畜牧兽医科学研究所 武汉畜牧兽医科学研究所 武汉畜牧兽医科学研究所 武汉畜牧兽医科学研究所 武汉畜牧兽医科学研究所 武汉畜牧兽医科学研究所 武汉畜牧兽医科学研究所 武汉畜牧兽医科学研究所 武汉畜牧兽医科学研究所 武汉畜牧兽医科学研究所
总体方案设计 核心技术实施 核心技术实施
核心技术实施 动物实验 核心技术实施 动物实验 动物实验 动物实验
男女兽医师 女畜牧师 男高级兽医师
男兽医师 高级畜牧师 高级畜
男牧师 男女畜牧师 女兽医师 女高级畜牧师
男畜牧师
九、结语
1、通过近3年时间的努力，项目研究组圆满的完成了该项目设计的各项研究任务。
2、项目研究所取得的成果和一切知识产权，以及有关科研单位和企业运用该项目成果正在开展的延展性研发工作必将对流感病毒培养的科学研究以及流感疫苗的生产行业起到有力的推动作用。
百度搜索“爱华网”,专业资料,生活学习,尽在爱华网
