爱华网活细胞工作站 Live cell Imaging System 主要是指在活细胞在体外模拟体内环境的条件下，进行显微成像采集定时拍摄，在白光或荧光下观测活细胞的增殖细胞迁移粘附等等进行细胞分析成像。
活细胞工作站LCI活细胞工作站活细胞荧光成像工作站活细胞显微成像采集系统LiveCellImagingSystem活细胞图像拍摄活细胞观测活细胞增殖活细胞迁移等等活细胞的分析监测系统，现在市场上使用的活细胞工作站由高级自动倒置显微镜、活细胞长时间孵育系统、Z轴微光切系统（数码共聚焦系统）、单色仪、高灵敏冷CCD、图像软件工作站组成。还需要加热控制器；温度控制器；CO2控制器；CO2培养箱。用于培养状态下细胞动态的研究。仪器可以自动聚焦、单细胞追踪、多位点成像。成像速度高、图像清晰度高
活细胞工作站可实现在细胞水平上的定性和定量分析、活细胞图像处理、活细胞动态示踪。在分子水平，可做到基因定位定量表达的动态分析、蛋白质合成降解运输和相互作用的动态研究、细胞骨架的代谢动力学测定和细胞周期各时相的动态观察等。活细胞动态观察、长时间采图、电影；极快速荧光事件记录；细胞骨架（细胞3D结构重建、及空间定位）、蛋白质合成和胞内信号传导等研究；荧光共振能量转移FRET；荧光共定位；荧光追踪；荧光图像处理、测量。
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活细胞成像面临的一个主要挑战是如何在实验过程中保持细胞的活性，并使细胞的机能尽可能接近于自然状态。
此外，某些细胞类型（例如培养的细胞）在实验过程中需要进行保温处理和二氧化碳浓度的条件。高级的保温室可尽量降低显微镜载物台上所培养细胞的分裂活动。而传统的活细胞工作站由于无法在培养箱的环境条件下进行显微图像的采集，必需使用在与显微镜相配套的控温系统以保证细胞培养生长的温度，而且还要使用二氧化碳和氧气的相关附件，在活细胞显微成像上增加了使用难度和购买成本，因此如何简单方便的使活细胞显微成像的实现，一直是众多仪器厂商在不断的发展目标，而Micforce米力光国际co.ltd提供廉价高效方便的活细胞成像工作站得到了众多用户的认可。
?JuLI高级细胞成像仪活细胞荧光成像仪活细胞观测仪
? 可放在培养箱或生物安全柜中使用，进行活细胞实时观察和时间序列（Timelapse）实验
?Wi-Fi传输：可在iPhone、iPad、PC等终端上进行实时监控，而无需从培养箱中取出
?一体化设计，触屏操控，外观时尚，操作简便
?超长寿命：配置40,000小时的蓝色LED光源（可选红色）
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?使用环境无限制：可在任意室内光线（光照或暗室）条件下观察
?三种观察模式，满足不同要求：白光、荧光及叠加模式，图像清晰
?自带图像分析软件：扩展JuLI的应用功能，可进行细胞增殖、迁移、计数、及细胞表面标记物分析等
?仪器用途：
??活细胞成像；（定时拍摄功能）
??细胞迁移测定；
??优化细胞分析；
??细胞培养质量控制；
??细胞增殖分析
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?仪器参数：
micforce
电源：AC100-240V,50-60Hz
CPU:AMDAU1250
放大率：10x和20x
滤光器：激发光、散射光、二向色滤光片
光源：白光/蓝光LED（488nm）
可选：白光/红光（630nm）
相机：CMOS1.3M像素（1280X1024）
显示器：7’TFT-LCD（WVGA,800×480）
重量：<5Kg
尺寸：220×375×220mm
micforce
目的通过将骨髓间充质干细胞(BMSCs)培养在静电纺丝素/聚乳酸纳米纤维上,研究BMSCs的生长及成神经分化情况.方法用家蚕丝素、柞蚕丝素分别与聚乳酸共混制成静电纺丝素/聚乳酸纳米纤维,将第5代大鼠BMSCs培养其上,于24h后通过活细胞工作站观察细胞的黏附情况,并进行表型鉴定及存活检测.接种后待细胞长至60%左右,用bFGF/BHA诱导细胞成神经分化,并设多聚赖氨酸组进行对照.在诱导5h和维持48h时,观察细胞的形态学改变,通过免疫荧光法鉴定神经细胞特异性标志物Nestin,β-Ⅲ-Tubulin和NCAM的表达并进行定量统计分析.结果BMSCs在静电纺丝素/聚乳酸纳米纤维上的黏附情况良好,细胞生长于纳米纤维上.存活检测中几乎未发现死细胞,多数细胞在材料上可存活.神经分化的形态学改变与多聚赖氨酸组一致,并且培养在纳米纤维上的细胞分化时出现的突起可缠绕在纺丝纤维上.神经特异标志的表达情况与多聚赖氨酸对照组的差异无统计学意义(P>0.05).结论静电纺丝素,聚乳酸纳米纤维具有良好的生物相容性,可支持BMSCs的黏附及成神经分化,且对细胞生存无毒性.
目的将活细胞工作站（LCS）应用于实时观察小鼠卵母细胞后期成熟和极体排放过程。方法运用LCS技术平台,利用hoechst33342标记DNA,同时结合明场观察,实时记录小鼠卵母细胞后期成熟和第二极体排放过程。结果在建立最适工作条件后,成功将LCS技术平台应用于小鼠卵母细胞观察,获得了第二极体排放的实时影像。结论LCS技术可成功地应用于小鼠卵母细胞观察,为进一步扩展LCS应用范围,获得卵母细胞及早期胚胎生长发育过程的实时影像打下良好的基础
目的探讨不同直径丝素蛋白纳米纤维(silkfibroinnanofibers,SFS)对嗅鞘细胞(olfactoryensheathingcells,OECs)生长及迁移的影响,为脊髓损伤(spinalcordinjury,SCI)修复材料的选择提供实验基础和理论依据。方法(1)SFS的制备:运用静电纺丝技术制备SFS,并通过扫描电镜(scanningelectronmicroscope,SEM)观察。(2)OECs的纯化培养:取SD大鼠嗅球新鲜分离的OECs,采用改良差速贴壁法纯化培养。(3)OECs与SFS的复合培养:将纯化后的OECs分别接种至以左旋多聚赖氨酸(poly-l-lysine,PLL)(对照组)和SFS(400nm,1200nm)(实验组)包被盖玻片的培养皿中进行复合培养。(4)检测指标:复合培养不同时间点行倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞形态、生长、分布及与材料黏附情况。神经生长因子受体p75(nervegrowthfactorreceptorp75,NGFRp75)及胶质原纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)免疫荧光染色测定细胞表现型,噻唑兰(ThiazoylBlueTetrazoliumBromide,MTT)法测定支架材料上OECs的增殖情况,死活细胞染色试剂及流式细胞术检测细胞生存率,细胞的迁移通过LeicaAF6000活细胞工作站拍摄得到图像,活细胞工作站动态跟踪观察OECs生长迁移并计算细胞迁移轨迹、迁移行为、迁移效率、迁移速率。结果(1)倒置相差显微镜示SFS上培养的OECs与对照组相比,细胞沿丝素纤维迁移,细胞突起方向走向较一致,形态特征无显著差异。(2)扫描电镜观察显示SFS平均直径约为(395±3)nm、(1210±7)nm,纤维呈三维立体网状结构,分布均匀,OECs与材料结合紧密,且细胞突起方向与纤维走向较一致,形态与对照组无显著性差异。(2)免疫荧光染色:培养4d时,免疫荧光染色显示实验组NGFRp75/GFAP阳性,OECs在SFS材料上仍保留其特有的表现型。(3)MTT检测显示:培养第4d时,对照组OECs的吸光度值较1200nm直径的材料OECs的吸光度值有显著差异(p0.05),培养第7d时,对照组OECs的吸光度值较实验组吸光度值有显著差异(p0.05),而且OECs在400nmSFS材料上的吸光度值比在1200nmSFS材料上的吸光度值高,有统计学意义(p0.05)。400nmSFS相比1200nmSFS更能促进OECs的增殖。(4)死活细胞染色试剂检测显示:在培养第4、7天时,实验组细胞形态较对照组正常,成活率较高,两组死亡细胞数比较无显著性差异。(5)流式细胞术检测结果显示:在培养第4天时,实验组OECs较对照组OECs的凋亡率无显著差异(p0.05)。(6)活细胞工作站观察显示:细胞的迁移速率,迁移效率和对照组相比均无显著地统计学差异(p0.05),两种直径的SFS对OECs在纤维上的迁移速率、迁移效率没有显著影响。结论不同直径丝素蛋白纳米纤维对嗅鞘细胞的生长与迁移均具有支持和引导作用,SFS有望成为一种新型的组织工程支架材料结合OECs移植修复脊髓损伤。目的确定顺式高尔基体蛋白(GM130)对小鼠卵母细胞纺锤体迁移及减数不对称分裂的影响.方法免疫荧光法检测GM130在小鼠卵母细胞的定位,活细胞工作站延时拍摄系统捕捉纺锤体在降调GM130表达后的的动态变化.结果降调GM130的表达后,第一极体排出率下降,在排出的极体中,大极体的比率升高；但对微丝网络及微丝帽的影响不明显.向卵母细胞内注射β5-tubulin-GFPmRNA和GM130特定的寡聚核苷酸(morpholino,MO)的混合物后,用活细胞工作站延时拍摄系统证实了降调GM130会影响卵母细胞纺锤体的迁移,纺锤体单极拉长,并能与该侧的皮质接触,产生胞质分裂环,导致大极体排出.若拉长的纺锤体尚不能与皮质接触,则细胞阻滞在分裂中期Ⅰ(MI期),没有极体排出.另外,降调GM130的表达也会影响磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶1/2(p-MEK1/2)在纺锤体极的定位,用丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)的抑制剂U0126处理MI期的卵母细胞则发现GM130不再在纺锤体两极聚集,而是散在分布于胞浆.结论GM130可能参与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在小鼠卵母细胞纺锤体迁移及不对称分裂中起重要作用.
Ⅱ型糖尿病作为一种病理机制复杂的代谢紊乱疾病,和肥胖、高血压、高血脂、动脉粥样硬化等疾病共同发生发展、紧密联系,合称为代谢综合征,其中糖尿病血管并发症严重危害着人类的健康。作为糖尿病的共同特征,高血糖是参与导致糖尿病血管功能病变的不同发病机制及发病环节中一个独立的重要致病因素。血管平滑肌细胞的功能损伤在糖尿病血管并发症的发生发展中起着至关重要的作用,而其损伤又是多种影响因素作用于不同发病环节、影响多种分子机制的结果。本研究提出建立高糖刺激的平滑肌细胞损伤模型,并可用于抗糖尿病血管并发症药物的筛选。研究的目的是利用培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞,考察高糖对细胞功能的损伤,利用基于细胞的阻抗分析系统监测平滑肌细胞的增殖、通过活细胞工作站实时观察平滑肌细胞的迁移情况,并在模型建立的基础上进行具有平滑肌细胞保护作用的药物评价。将基于细胞的阻抗分析应用于平滑肌细胞增殖功能的研究,可实时监测细胞从贴附、伸展、增殖到融合的过程,以及刺激因素诱导的平滑肌细胞增殖变化的过程,并利用传统的WST-1细胞活性检测手段验证了这一变化。利用活细胞工作系统,可对孵育在培养箱中的平滑肌细胞进行长时程的动态观测。研究结果表明,高糖(22.5mmol/L)诱导了平滑肌细胞的异常增殖迁移,而黄芪甲苷能显著的改善高糖引起的平滑肌细胞功能损伤,抑制在高糖诱导下的平滑肌细胞的增殖活力和迁移水平。在该研究结果的基础上得出以下结论:RT-CES系统基于细胞阻抗的实时监测方法能动态地评价血管平滑肌细胞的功能损伤,并能有效地评价中药单体对平滑肌细胞的保护作用;活细胞工作站可对平滑肌细胞在生理病理条件下的活动进行实时动态监测,同时也可用于药效评价;黄芪甲苷对平滑肌细胞有一定的保护作用,可预防和缓解糖尿病血管并发症,具有一定的开发前景。该实验方法的建立,为今后深入研究血管平滑肌细胞功能,在心血管疾病发生过程中的作用及中药有效成分的筛选评价打下一定的基础。
目的恶性胶质瘤是目前最为盛行的原发脑瘤,干细胞移植极有希望治疗胶质瘤。因骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)体内体外均显示很强的胶质瘤趋化性,所以应用BMSCs治疗胶质瘤即是很好的细胞治疗手段。然而,关于细胞因子参与BMSCs迁移的报道却很少,本研究旨在探讨成神经分化的BMSCs向C6细胞条件培养基和SDF-1α(stromalcell-derivedfactor1α)的迁移行为。方法本实验分三个阶段研究成神经分化的BMSCs向C6细胞条件培养基和SDF-1α的迁移。(1)采用Percoll分离法在体外培养并扩增BMSCs,通过免疫荧光染色的方法检测表面抗原对BMSCs进行鉴定。(2)采用抗氧化剂诱导方案诱导BMSCs向神经样细胞分化,即先用浓度为10ng/ml的bFGF预诱导24h,加入浓度为200μM的丁羟基茴香醚(BHA)和2%的二甲基亚砜(DMSO)诱导5h,再用含有N2的H-DMEM维持48h。观察诱导分化过程中BMSCs的形态变化,通过免疫荧光染色检测诱导的细胞表达神经细胞特异性标志物Nestin、β-III-tubulin和NSE的情况。(3)运用Dunnchamber研究了分化细胞在具有浓度梯度的趋化因子中的定向迁移行为。分化不同状态BMSCs的迁移通过德国LeicaAF6000活细胞工作站拍摄得到图像,应用NIHImageJ分析图像,每个分化点随机抽取40个细胞进行统计得到细胞的迁移速率、迁移效率和诱导5h的迁移轨迹。接着,我们运用Boydenchamber研究了BMSCs在成神经分化过程中的趋化性迁移(Chemotaxis)和随机迁移(Chemokinesis)。以正常培养的BMSCs作为对照,随机抽取对照组和实验组各10个视野,细胞计数,计算迁移系数,迁移系数=实验组/对照组。结果(1)采用Percoll淋巴细胞分离液及不连续密度梯度法,成功分离培养出大鼠骨髓间充质干细胞,可稳定传至20代以上。表型鉴定结果为CD29、CD71、CD90、CD106呈阳性,CD34、CD45呈阴性。(2)用bFGF/BHA诱导BMSCs向神经样细胞分化,预诱导24h,细胞变成长梭形;诱导5h,细胞即发生剧烈的形态改变,出现胞体回缩、突触伸展等神经细胞的形态特征;维持48h,细胞出现更多的分叉,并出现二级叉。对照组细胞无明显的形态变化,免疫荧光染色显示诱导的细胞表达神经前体细胞标志物Nestin、β-III-tubulin和成熟神经元标志物NSE。对照组不表达NSE,诱导组与对照组比较有统计学差异(P0.05)。(3)Dunnchamber分析显示,C6细胞条件培养基组和SDF-1α组诱导细胞的迁移速率和迁移效率明显高于对照组,表明C6细胞条件培养基和SDF-1α对BMSCs具有趋化作用,单个细胞迁移轨迹实验也证实了这一结果。此外,分化不同状态的BMSCs向C6细胞条件培养基和SDF-1α的趋化程度也不同。当Boyden上室为L-DMEM悬浮的细胞,下室为C6细胞条件培养基时,分化细胞的迁移数目明显多于对照;而当上下室均为C6细胞条件培养基时,分化细胞的随机迁移与对照无显著差异。结论BMSCs的定向迁移与分化状态密切相关,预诱导24h分化细胞的定向迁移最强
