血凝抑制试验 血凝(HA)试验操作攻略

血凝(HA)试验操作攻略――简介

有些病毒如禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(ND)等表面具有能红细胞表面抗原发生凝集的血凝素蛋白(HA),因此能凝集特定动物的红细胞,常见的有鸡、鸭、豚鼠等。血凝试验正是利用这个原理来测定病毒滴度的,下面是本人总结的试验具体过程,希望帮到需要的朋友。

血凝(HA)试验操作攻略――工具/原料
1%鸡红细胞,96孔血凝板,移液器及吸头,PBS缓冲液等血凝(HA)试验操作攻略――方法/步骤

血凝(HA)试验操作攻略 1、

试验前准备工作。准备好试验需要的所有材料,包括待检测的样品、1%鸡红细胞、96孔血凝板、移液器及吸头、恒温箱等。


血凝(HA)试验操作攻略 2、

用PBS铺板。采用75微升体系进行试验。调节移液器至25微升,吸取PBS缓冲液加入96孔血凝板中,有几个样品就加几排孔。


血凝(HA)试验操作攻略 3、

倍比稀释。吸取25微升待检样品依次加入第1纵排孔中,吹打15下后吸取25微升再加入第2纵排孔,再吹打15下,吸取25微升加入第3纵排孔中,依次类推,直至第11纵排孔,吹打混匀后吸25微升后连同吸头一起弃去,第12纵排为红细胞对照。

血凝(HA)试验操作攻略_血凝试验

血凝抑制试验 血凝(HA)试验操作攻略

血凝(HA)试验操作攻略 4、

补液。因实验过程中液体不断蒸发,为防止液体蒸干,需要进行一次补液,用PBS即可,每孔25微升。


血凝(HA)试验操作攻略 5、

加红细胞。补液结束后加1%红细胞,每孔25微升,然后置于25℃温箱或者室温反应20-40分钟左右,读数即可。


血凝(HA)试验操作攻略 6、

读数时,以出现完全凝集的孔作为病毒的血凝滴度。

血凝(HA)试验操作攻略――注意事项
试验需佩戴手套室温一般指25℃左右

  

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